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rollandyoung金蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒DNA提取成了這樣，請大家?guī)兔Ψ治鲆幌?
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一、試驗(yàn)內(nèi)容： 1. 質(zhì)粒pCAMBIA1301DNA提取 2. 對提取的質(zhì)粒DNA根據(jù)質(zhì)粒圖譜上的酶切位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證性的酶切，所用酶Xho1。 3. 根據(jù)一篇已發(fā)表的論文所用的引物序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行驗(yàn)證性的PCR擴(kuò)增。 二、主要試驗(yàn)材料：含有質(zhì)粒的大腸桿菌（已經(jīng)液體LB培養(yǎng)基搖菌16小時(shí)） 三、方法：參照分子克隆實(shí)驗(yàn)指南第三版 方案一 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：小量制備 四、結(jié)果：1.質(zhì)粒DNA見電泳照片 2.酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳顯示無酶切產(chǎn)物出現(xiàn) 3. PCR擴(kuò)增無擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn) 問題： 綜合上述結(jié)果，使我對我提取的質(zhì)粒DNA的質(zhì)量產(chǎn)生了疑問，總結(jié)了以下問題 1. 我知道正常的質(zhì)粒DNA電泳應(yīng)該能夠呈現(xiàn)出很亮且較寬的帶型，這種情況屬于正常嗎？大家是否以前也遇到過這樣的問題，是怎樣解決的？ 2. 質(zhì)粒DNA提取過程中有哪些需要注意的地方？ 3. 提取質(zhì)粒DNA用到的試劑有特殊的要求和需要注意的地方嗎？ 4. 除上述問題外還有哪些需要注意和改進(jìn)的地方？ 已經(jīng)被這個(gè)問題困擾了整個(gè)假期了，嚴(yán)重地影響了下一步的試驗(yàn)進(jìn)程，故求助的心情十分之迫切，希望大家不吝賜教，在此先行謝過！ |
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xbl3688
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rollandyoung(金幣+10): 感謝你的幫助，祝實(shí)驗(yàn)順利！ 2011-08-29 16:25:01
西瓜(金幣+1): 熱心專家！ 2011-08-29 17:53:10
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西瓜(金幣+1): 熱心專家！ 2011-08-29 17:53:10
| 關(guān)于質(zhì)粒提取可以參考http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3069255 |
2樓2011-08-29 15:41:09
peace12039088
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3樓2011-08-29 16:55:33
rollandyoung
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4樓2011-08-29 18:56:48
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