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飛翔的詩人銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
1.5kb的 PCR目的序列GC含量高達67%,引物Tm值達90℃,怎么P比較好?
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本人根據(jù)目的序列的CDS區(qū)設(shè)計出引物,由于目的序列本身GC含量達67%,設(shè)計出的引物GC含量也超過了60%,oligo給出的兩條引物的Tm值均在90℃左右,其推薦的退火溫度為68.4℃(最高72度), 上游 5'-tcGAATTCatgtcccagc ccgacgccac cccgtt-3' (EcoR I酶切位點) 下游 5'-tctAAGCTTtcaggctccg gcccggttga ggacg-3'(Hind III酶切位點) oligo最后給引物的PCR評價沒問題,不過這么高的GC含量,該怎么P比較好?如果是用帶GC緩沖液的Taq酶,梯度PCR反應條件該如何設(shè)計? |
核酸生物學實驗經(jīng)驗 | 【分子生物】EPI帖 |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

金蟲 (正式寫手)

銀蟲 (小有名氣)
銀蟲 (小有名氣)
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