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新人小玥木蟲 (正式寫手)
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[求助]
植物DNA提取問題
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最近在提兩種植物的DNA，都出現(xiàn)以下情況： 1、CTAB裂解之后溶液比較粘稠 2、用氯仿異戊醇抽提3次后用冰無水乙醇和醋酸鈉沉淀，沉淀后用TE溶解，DNA溶液還是比較粘稠 3、PCR檢測無任何產(chǎn)物 4、另外用試劑盒提取后同樣遇到上述問題 請問這是什么問題？如何解決呢？麻煩各位高手幫我出謀劃策一下吧~~ |
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新人小玥
木蟲 (正式寫手)
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3樓2011-09-01 13:38:53
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2樓2011-09-01 12:52:40
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4樓2011-09-01 14:44:51
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1.你提取的是什么植物？有些植物的DNA由于含有豐富的酚或多糖等跟DNA性質(zhì)很接近的雜質(zhì)，在提取過程難以很嚴格的跟DNA分開。 2.造成粘稠的原因很多： a.樣品中富含多糖類物質(zhì)（優(yōu)化裂解體系） b.樣品量使用過多（減少樣品使用量，增加裂解液） 3.溶解后先電泳及測OD情況如何？電泳點樣孔是否有雜質(zhì)？ 個人建議： 1）取一容易做的植物（如水稻葉片）同時操作以作對照，以檢測整個體系及實驗操作有沒有問題。 2）液氮研磨充分后加入裂解液，65度水浴30-60min,其間每隔5min混勻一次。 3）溶解時加入適量的TE后，50度水浴30-60min甚至過夜。 |
6樓2011-11-03 09:59:26
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