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新人小玥木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
植物DNA提取問(wèn)題
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最近在提兩種植物的DNA，都出現(xiàn)以下情況： 1、CTAB裂解之后溶液比較粘稠 2、用氯仿異戊醇抽提3次后用冰無(wú)水乙醇和醋酸鈉沉淀，沉淀后用TE溶解，DNA溶液還是比較粘稠 3、PCR檢測(cè)無(wú)任何產(chǎn)物 4、另外用試劑盒提取后同樣遇到上述問(wèn)題 請(qǐng)問(wèn)這是什么問(wèn)題？如何解決呢？麻煩各位高手幫我出謀劃策一下吧~~ |
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w2boluo
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
新人小玥(金幣+3): 謝謝您的建議，我再溶幾天試試 2011-09-01 15:50:47
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2011-10-24 12:04:13
新人小玥(金幣+3): 謝謝您的建議，我再溶幾天試試 2011-09-01 15:50:47
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 謝謝參與 2011-10-24 12:04:13
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很粘稠一般都有。用槍頭挑會(huì)看見(jiàn)明顯的一根根長(zhǎng)絲狀，說(shuō)明dna聚集在一起。拿去跑膠的時(shí)候，只要取到這種絲狀dna的區(qū)域，一般都很多，但是沒(méi)有取到的時(shí)候，電泳出來(lái)的DNA條帶就很淺。CTAB法提出來(lái)的DNA溶解時(shí)間一定要長(zhǎng)，因?yàn)樗植己懿痪鶆�，總是聚集成團(tuán)狀。也不是很好稀釋。 |
4樓2011-09-01 14:44:51
w2boluo
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2樓2011-09-01 12:52:40
新人小玥
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3樓2011-09-01 13:38:53
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1.你提取的是什么植物？有些植物的DNA由于含有豐富的酚或多糖等跟DNA性質(zhì)很接近的雜質(zhì)，在提取過(guò)程難以很?chē)?yán)格的跟DNA分開(kāi)。 2.造成粘稠的原因很多： a.樣品中富含多糖類(lèi)物質(zhì)（優(yōu)化裂解體系） b.樣品量使用過(guò)多（減少樣品使用量，增加裂解液） 3.溶解后先電泳及測(cè)OD情況如何？電泳點(diǎn)樣孔是否有雜質(zhì)？ 個(gè)人建議： 1）取一容易做的植物（如水稻葉片）同時(shí)操作以作對(duì)照，以檢測(cè)整個(gè)體系及實(shí)驗(yàn)操作有沒(méi)有問(wèn)題。 2）液氮研磨充分后加入裂解液，65度水浴30-60min,其間每隔5min混勻一次。 3）溶解時(shí)加入適量的TE后，50度水浴30-60min甚至過(guò)夜。 |
6樓2011-11-03 09:59:26
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