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gloryping

鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 關(guān)于RPMI1640培養(yǎng)基

目前在培養(yǎng)正常的肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞，使用的培養(yǎng)基分別是用RPMI1640+20%FBS和RPMI1640+10%FBS。昨晚做正常細(xì)胞的傳代實(shí)驗(yàn)，傳完后才發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基下面有一些白色碎片狀東西，然后將傳的三盤(pán)細(xì)胞丟了兩盤(pán)，留下一盤(pán)觀察是否污染。今早來(lái)看，培養(yǎng)基沒(méi)有渾濁，細(xì)胞貼壁效果很好，只是上面漂浮著一些死細(xì)胞，這可能是由于復(fù)蘇后沒(méi)傳幾代的緣故。自己不放心，又讓師兄來(lái)看，師兄說(shuō)細(xì)胞沒(méi)有污染。但是放置冰箱中的培養(yǎng)基出現(xiàn)白色東西，卻不知道如何解釋。腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基一直正常，而正常細(xì)胞的培養(yǎng)基已經(jīng)是第二次出現(xiàn)這種東西了，我操作過(guò)程是一樣的，為什么它老是出現(xiàn)白色東西？是污染嗎？還是由于正常細(xì)胞培養(yǎng)基血清濃度高而出現(xiàn)的蛋白質(zhì)結(jié)晶？希望有經(jīng)驗(yàn)的人解答一下，萬(wàn)分感謝！

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1樓 2011-09-05 09:39:58

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terry130

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【答案】應(yīng)助回帖

gloryping(金幣+2): 2011-09-07 17:48:53

應(yīng)該不是蛋白析出的問(wèn)題，就算是純血清也沒(méi)有蛋白析出的，何況是稀釋了的。除非你用的血清質(zhì)量有問(wèn)題。細(xì)胞污染的話污染物也要同步生長(zhǎng)且嚴(yán)重影響細(xì)胞生長(zhǎng)，如果不是這種現(xiàn)象的話只能認(rèn)為是雜質(zhì)或者代謝產(chǎn)物，不影響的，不用理會(huì)。另外不建議你自己去離心或者二次過(guò)濾血清，商品血清都是無(wú)菌處理過(guò)的，你這樣一折騰的話反而是畫(huà)蛇添足了。死細(xì)胞在任何培養(yǎng)體系里都是不能完全避免的，最初復(fù)蘇的時(shí)候是很嚴(yán)重的，后續(xù)培養(yǎng)時(shí)如果長(zhǎng)時(shí)間不換液的話也會(huì)出現(xiàn)大量死亡，只要死亡量不是很大，活著的細(xì)胞狀態(tài)仍然很好就可以無(wú)視死細(xì)胞。

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摒氣動(dòng)方息，寧神心自明。

5樓2011-09-07 15:32:43

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nuoyaeva

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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★ ★
adslye(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~ 2011-09-07 13:08:55

真菌污染的情況下，真菌可以和細(xì)胞共生的，各長(zhǎng)各的
當(dāng)然也可能是其他情況，不過(guò)20%的FBS，以前見(jiàn)別人配過(guò)，我自己都是用10%的，貌似沒(méi)有會(huì)析出蛋白的印象...

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生活是美好的

2樓2011-09-06 16:52:23

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gloryping

鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)

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adslye(金幣+2): 你的這個(gè)反饋很哈！鼓勵(lì)鼓勵(lì)！ 2011-09-07 13:09:26

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2樓: Originally posted by nuoyaeva at 2011-09-06 16:52:23:
真菌污染的情況下，真菌可以和細(xì)胞共生的，各長(zhǎng)各的
當(dāng)然也可能是其他情況，不過(guò)20%的FBS，以前見(jiàn)別人配過(guò)，我自己都是用10%的，貌似沒(méi)有會(huì)析出蛋白的印象...

細(xì)胞木事，長(zhǎng)的挺好的，還用培養(yǎng)基做了試培實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)污染物。今天不放心，重新配置了培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)血清的管底有一團(tuán)東西，后來(lái)查到相關(guān)資料：血清中的絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理。所以應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題了。O(∩_∩)O謝謝

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3樓2011-09-06 16:59:58

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nuoyaeva

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3樓: Originally posted by gloryping at 2011-09-06 17:59:58:
細(xì)胞木事，長(zhǎng)的挺好的，還用培養(yǎng)基做了試培實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)污染物。今天不放心，重新配置了培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)血清的管底有一團(tuán)東西，后來(lái)查到相關(guān)資料：血清中的絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白 ...

原來(lái)這這樣，我也學(xué)習(xí)下~~

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4樓2011-09-07 12:38:03

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rb

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gloryping(金幣+2): 2011-09-07 17:51:47

可能你的血清是熱滅活的。若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56度，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。不過(guò)容易堵塞濾器。這個(gè)一般不影響培養(yǎng)，沒(méi)啥問(wèn)題的。

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寢室樓的大爺、大媽都是哲學(xué)家，他們每天都在思考人類最根本的三個(gè)問(wèn)題：你是誰(shuí)？你從哪兒來(lái)？要去哪兒？

6樓2011-09-07 15:44:26

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gloryping(金幣+2): 2011-09-07 17:53:22

對(duì)于不放心的培養(yǎng)基或溶液可以再次過(guò)濾除菌。

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Ican，Ido.

7樓2011-09-07 16:50:45

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5樓: Originally posted by terry130 at 2011-09-07 15:32:43:
應(yīng)該不是蛋白析出的問(wèn)題，就算是純血清也沒(méi)有蛋白析出的，何況是稀釋了的。除非你用的血清質(zhì)量有問(wèn)題。細(xì)胞污染的話污染物也要同步生長(zhǎng)且嚴(yán)重影響細(xì)胞生長(zhǎng)，如果不是這種現(xiàn)象的話只能認(rèn)為是雜質(zhì)或者代謝產(chǎn)物，不 ...

恩恩 O(∩_∩)O謝謝解答，學(xué)到了很多

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8樓2011-09-07 17:51:09

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6樓: Originally posted by rb at 2011-09-07 15:44:26:
可能你的血清是熱滅活的。若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56度，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。不 ...

(⊙v⊙)嗯血清就這樣用了，沒(méi)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。主要是我剛開(kāi)始培養(yǎng)細(xì)胞，其實(shí)還沒(méi)遇到污染，有時(shí)老是自己嚇自己，O(∩_∩)O~

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9樓2011-09-07 17:53:13

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7樓: Originally posted by pxmyz at 2011-09-07 16:50:45:
對(duì)于不放心的培養(yǎng)基或溶液可以再次過(guò)濾除菌。

培養(yǎng)基試培后木有問(wèn)題，應(yīng)該不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)了，O(∩_∩)O~

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10樓2011-09-07 17:53:55

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