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[求助] 小鼠胚胎培養(yǎng)液KSOM的問題

KSOM好像只有Millipore有是嗎？不知道Millipore怎么回事，現(xiàn)在訂藥品總是很不給力的老是訂不上。我想自己配KSOM呢，但是照著《小鼠胚胎操作》那本書上的配方配出來的液體效果不理想。不知各位有KSOM的比較成熟的配方嗎？謝謝！

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1樓 2012-02-28 13:52:00

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
閨閨love: 金幣+2, ★有幫助 2012-03-19 19:01:31

書上的配方?jīng)]問題，我們培養(yǎng)受精卵囊胚率可以達(dá)到100%。
如果要優(yōu)化，BSA可以加到6或8，效果非常好。
不知道你用的是什么試劑，必須用Sigma和Gibco。水質(zhì)也非常重要。胚胎對(duì)這個(gè)還是很敏感的。
小鼠本身飼養(yǎng)條件也是必須控制的。
不知道你說的效果不理想是指什么。阻滯、發(fā)育不好、胚胎質(zhì)量差？

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2樓2012-03-18 23:16:25

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引用回帖:

2樓: Originally posted by stfoxst at 2012-03-18 23:16:25:
書上的配方?jīng)]問題，我們培養(yǎng)受精卵囊胚率可以達(dá)到100%。
如果要優(yōu)化，BSA可以加到6或8，效果非常好。
不知道你用的是什么試劑，必須用Sigma和Gibco。水質(zhì)也非常重要。胚胎對(duì)這個(gè)還是很敏感的。
小鼠本身飼養(yǎng)條 ...

我完全按照書上的配過一次，細(xì)胞發(fā)育停滯且皺縮，皺縮有可能是滲透壓的問題，配完液體確實(shí)沒測(cè)滲透壓。試劑都是sigma的，水應(yīng)該也沒問題呢。不過，現(xiàn)在已經(jīng)在millipore訂了ksom了，只是還沒到貨，在等呢，很慢！

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3樓2012-03-19 19:08:25

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★ ★ ★
telomerase: 金幣+3, 謝謝你的熱心應(yīng)助，分享經(jīng)驗(yàn)�。�！ 2012-03-20 09:27:33

引用回帖:

3樓: Originally posted by 閨閨love at 2012-03-19 19:08:25:
我完全按照書上的配過一次，細(xì)胞發(fā)育停滯且皺縮，皺縮有可能是滲透壓的問題，配完液體確實(shí)沒測(cè)滲透壓。試劑都是sigma的，水應(yīng)該也沒問題呢。不過，現(xiàn)在已經(jīng)在millipore訂了ksom了，只是還沒到貨，在等呢，很慢！

如果有阻滯肯定是某個(gè)成分有問題。
我們也不測(cè)滲透壓，沒必要。
PH第一次調(diào)完后，要放到培養(yǎng)箱2-4h，拿出來再調(diào)到7.5。
這樣找原因太困難了。其實(shí)最好的辦法是你找一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，去跟著做一次，養(yǎng)到囊胚。以后就能做好了。
我們實(shí)驗(yàn)室的師弟師妹開始也會(huì)遇到這種問題，跟著做一兩次就好了，也說不上到底錯(cuò)誤出在哪里。不過倒是有人配的液體一加酚紅就是紫的，那肯定是某個(gè)成分加錯(cuò)了，應(yīng)該是黃色。
要是特別有錢買也無所謂啦

。除了KSOM，G1/G2更好用。有錢就買這個(gè)吧。

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4樓2012-03-20 00:04:38

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引用回帖:

請(qǐng)問你們體外培養(yǎng)囊賠率達(dá)到100%，是從幾細(xì)胞期開始培養(yǎng)的？培養(yǎng)基是自己配制還是購買？

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彩云之南的愿望還能實(shí)現(xiàn)嗎

5樓2012-04-20 11:37:04

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5樓: Originally posted by timmychina at 2012-04-20 11:37:04:
請(qǐng)問你們體外培養(yǎng)囊賠率達(dá)到100%，是從幾細(xì)胞期開始培養(yǎng)的？培養(yǎng)基是自己配制還是購買？

是從受精卵開始的，也就是1細(xì)胞期。
培養(yǎng)液是我們自己配制的KSOM。
現(xiàn)在的小鼠胚胎體外培養(yǎng)體系已經(jīng)很成熟了，各方面條件控制好的話，達(dá)到100%的囊胚率很正常，文獻(xiàn)中也有相關(guān)的報(bào)道。

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6樓2012-04-23 17:00:33

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4樓: Originally posted by stfoxst at 2012-03-20 00:04:38:
如果有阻滯肯定是某個(gè)成分有問題。
我們也不測(cè)滲透壓，沒必要。
PH第一次調(diào)完后，要放到培養(yǎng)箱2-4h，拿出來再調(diào)到7.5。
這樣找原因太困難了。其實(shí)最好的辦法是你找一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，去跟著做一次，養(yǎng)到囊胚。以后就 ...

G1/G2也是培養(yǎng)液?jiǎn)幔空?qǐng)問是哪個(gè)公司的？

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7樓2012-05-05 15:43:10

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6樓: Originally posted by stfoxst at 2012-04-23 17:00:33:
是從受精卵開始的，也就是1細(xì)胞期。
培養(yǎng)液是我們自己配制的KSOM。
現(xiàn)在的小鼠胚胎體外培養(yǎng)體系已經(jīng)很成熟了，各方面條件控制好的話，達(dá)到100%的囊胚率很正常，文獻(xiàn)中也有相關(guān)的報(bào)道。

現(xiàn)在ksom還是不好定，暫時(shí)用M16代替著

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8樓2012-05-05 15:44:09

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7樓: Originally posted by 閨閨love at 2012-05-05 15:43:10:
G1/G2也是培養(yǎng)液?jiǎn)幔空?qǐng)問是哪個(gè)公司的？

vitrolife的。做輔助生殖的都用，應(yīng)該好定到。
M16用于培養(yǎng)效果一般，實(shí)在不行可以試試CZB，2cell前用低糖的CZB，過了2cell換成高糖的，這個(gè)培養(yǎng)基效果也很好。

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9樓2012-05-08 11:13:14

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9樓: Originally posted by stfoxst at 2012-05-08 11:13:14:
vitrolife的。做輔助生殖的都用，應(yīng)該好定到。
M16用于培養(yǎng)效果一般，實(shí)在不行可以試試CZB，2cell前用低糖的CZB，過了2cell換成高糖的，這個(gè)培養(yǎng)基效果也很好。

我想訂millipore的ksom是因?yàn)樗蟹N產(chǎn)品不含BSA，不知M16、czb都含BSA呢，現(xiàn)在還是訂不到ksom，很著急呢。我準(zhǔn)備自己按書上的配方先配了，看看效果。

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10樓2012-05-09 16:59:30

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