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gloryping鐵桿木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于RPMI1640培養(yǎng)基
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| 目前在培養(yǎng)正常的肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞,使用的培養(yǎng)基分別是用RPMI1640+20%FBS和RPMI1640+10%FBS。昨晚做正常細(xì)胞的傳代實(shí)驗(yàn),傳完后才發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基下面有一些白色碎片狀東西,然后將傳的三盤細(xì)胞丟了兩盤,留下一盤觀察是否污染。今早來看,培養(yǎng)基沒有渾濁,細(xì)胞貼壁效果很好,只是上面漂浮著一些死細(xì)胞,這可能是由于復(fù)蘇后沒傳幾代的緣故。自己不放心,又讓師兄來看,師兄說細(xì)胞沒有污染。但是放置冰箱中的培養(yǎng)基出現(xiàn)白色東西,卻不知道如何解釋。腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基一直正常,而正常細(xì)胞的培養(yǎng)基已經(jīng)是第二次出現(xiàn)這種東西了,我操作過程是一樣的,為什么它老是出現(xiàn)白色東西?是污染嗎?還是由于正常細(xì)胞培養(yǎng)基血清濃度高而出現(xiàn)的蛋白質(zhì)結(jié)晶?希望有經(jīng)驗(yàn)的人解答一下,萬分感謝! |
細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
鐵桿木蟲 (正式寫手)

鐵桿木蟲 (正式寫手)

鐵桿木蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞木事,長的挺好的,還用培養(yǎng)基做了試培實(shí)驗(yàn),沒有發(fā)現(xiàn)污染物。今天不放心,重新配置了培養(yǎng)基,發(fā)現(xiàn)血清的管底有一團(tuán)東西,后來查到相關(guān)資料:血清中的絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理。所以應(yīng)該沒有問題了。O(∩_∩)O謝謝 |
木蟲 (正式寫手)
| 應(yīng)該不是蛋白析出的問題,就算是純血清也沒有蛋白析出的,何況是稀釋了的。除非你用的血清質(zhì)量有問題。 細(xì)胞污染的話污染物也要同步生長且嚴(yán)重影響細(xì)胞生長,如果不是這種現(xiàn)象的話只能認(rèn)為是雜質(zhì)或者代謝產(chǎn)物,不影響的,不用理會(huì)。另外不建議你自己去離心或者二次過濾血清,商品血清都是無菌處理過的,你這樣一折騰的話反而是畫蛇添足了。死細(xì)胞在任何培養(yǎng)體系里都是不能完全避免的,最初復(fù)蘇的時(shí)候是很嚴(yán)重的,后續(xù)培養(yǎng)時(shí)如果長時(shí)間不換液的話也會(huì)出現(xiàn)大量死亡,只要死亡量不是很大,活著的細(xì)胞狀態(tài)仍然很好就可以無視死細(xì)胞。 |

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