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wuguangxia銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
釀酒酵母轉(zhuǎn)化建立突變庫 已有4人參與
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各位蟲友們好！有沒有最近做酵母轉(zhuǎn)化的，我想向各位大蝦請教一下。 我最近做酵母轉(zhuǎn)化這一塊，但是需要很高的轉(zhuǎn)化效率，達(dá)到一定的庫容才行，也就是說建立一個突變文庫，有沒有人做過用連接產(chǎn)物直接轉(zhuǎn)化釀酒酵母感受態(tài)的？？？ |
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2樓2011-09-16 10:09:41
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lstt09nk(金幣+5): 感謝參與 2011-09-27 17:08:16
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l)實驗開始前兩天，接種待轉(zhuǎn)化的酵母菌株的單菌落于5mlYPD培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)過夜。 2)前一天晚上，取適量(5微升左右)的過夜培養(yǎng)液接種到30m1YPAD培養(yǎng)基，30℃振蕩培養(yǎng)過夜，到細(xì)胞密度為 1x10，細(xì)胞/m1(0D60 =0.3一0.5)。為獲得更高的轉(zhuǎn)化效率，可用YPAD稀釋培養(yǎng)液至細(xì)胞密度為 2x106細(xì)胞/m1，培養(yǎng)2~4h。 3)取1.2ml培養(yǎng)液在室溫下3000g離心lmin，收集細(xì)胞。細(xì)胞用lml無菌水重 懸，室溫下3000g離心lmin，沉淀細(xì)胞。 4)細(xì)胞用lml鏗鹽溶液(1體積10xTE緩沖液，1體積10x乙酸鏗貯液，8體 積無菌超純水，現(xiàn)配現(xiàn)用)重懸。 5)室溫下3000g離心lmin，去上清，重新用0.2ml鏗鹽溶液重懸細(xì)胞，感受態(tài) 制備完畢。 |
8樓2011-09-22 09:54:05
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