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酵母陽性轉(zhuǎn)化子篩選
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| 利用pYES2轉(zhuǎn)化后的酵母細胞，涂板在SD-url培養(yǎng)基上，菌落生長出來后，請問如何篩選其陽性的轉(zhuǎn)化子呢？還是做PCR嗎？以及為什么生長出來的菌落很少的呢？我用的是Invitrogen的easy transfromation Kit做的competent cell以及轉(zhuǎn)化�；旧暇椭挥�20多個菌落，這樣能篩選到陽性的嗎？？ |
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xiemin217
木蟲 (正式寫手)
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1.可以涂在2缺，或者更多的板試試 2.20幾個實在太少了，我一般做是滿板都是，可能的你的轉(zhuǎn)運DNA有問題。 3.酵母感受態(tài)狀態(tài)也很重要的，要新鮮的。 4.PCR是最簡單的鑒定方法了 |
3樓2011-09-23 17:33:41
2樓2011-09-23 11:24:34
yc652090251
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【答案】應(yīng)助回帖
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轉(zhuǎn)化效率太低了，我是用電轉(zhuǎn)的，轉(zhuǎn)化效率很高，另外你的質(zhì)粒濃度是不是不高啊，另感受態(tài)的OD很重要。 一個板20幾個菌落的話，直接拿來做菌落PCR，鑒定為陽性的，直接小瓶表達就可以了。 建議先試著做下這幾十個表達，同時提高轉(zhuǎn)化效率再進行篩選表達。 |
4樓2011-09-23 17:57:34
5樓2011-09-23 23:38:16
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