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酵母陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子篩選
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| 利用pYES2轉(zhuǎn)化后的酵母細(xì)胞，涂板在SD-url培養(yǎng)基上，菌落生長(zhǎng)出來(lái)后，請(qǐng)問(wèn)如何篩選其陽(yáng)性的轉(zhuǎn)化子呢？還是做PCR嗎？以及為什么生長(zhǎng)出來(lái)的菌落很少的呢？我用的是Invitrogen的easy transfromation Kit做的competent cell以及轉(zhuǎn)化。基本上就只有20多個(gè)菌落，這樣能篩選到陽(yáng)性的嗎？？ |
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5樓2011-09-23 23:38:16
2樓2011-09-23 11:24:34
xiemin217
木蟲 (正式寫手)
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1.可以涂在2缺，或者更多的板試試 2.20幾個(gè)實(shí)在太少了，我一般做是滿板都是，可能的你的轉(zhuǎn)運(yùn)DNA有問(wèn)題。 3.酵母感受態(tài)狀態(tài)也很重要的，要新鮮的。 4.PCR是最簡(jiǎn)單的鑒定方法了 |
3樓2011-09-23 17:33:41
yc652090251
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轉(zhuǎn)化效率太低了，我是用電轉(zhuǎn)的，轉(zhuǎn)化效率很高，另外你的質(zhì)粒濃度是不是不高啊，另感受態(tài)的OD很重要。 一個(gè)板20幾個(gè)菌落的話，直接拿來(lái)做菌落PCR，鑒定為陽(yáng)性的，直接小瓶表達(dá)就可以了。 建議先試著做下這幾十個(gè)表達(dá)，同時(shí)提高轉(zhuǎn)化效率再進(jìn)行篩選表達(dá)。 |
4樓2011-09-23 17:57:34
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