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hrjxx新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
大家可以看懂這樣的蛋白提取方法嗎？（用于雙向）
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1.Cut the tissue in several small pieces, add 10 ml ice chilled lysis buffer (150 mM phosphate buffer pH 7.5, 0.5 % Triton x-100, 1 mM PMSF, 15 ug/ml Aprotinin, 10 ug/ml Leupeptin, 10 ug/ml Pepstatin) and homogenize (best with an electrical tissue homogenizer 3x1min, prevent from warming up through ice-water bath) until cells are broken. 2.Transfer homogenate into 1.5 ml micro centrifuge tubes and spin for 15 min at 4 deg. Pool supernatant (~ 9 ml) determine protein concentration using a detergent compatible assay. 上面是我看到的雙向的提取方法，一直看的不是很明白，不知道哪位高手可以給講解下？我的疑點(diǎn)主要有兩個(gè)，1.這是小顆粒的樣品，沒(méi)有研碎成粉末，這樣能夠裂解嗎？2.蛋白可以很好的溶于磷酸鹽緩沖液?jiǎn)�？？后面還要直接測(cè)定上清呢 |
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清泉
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4樓2011-10-07 20:50:49
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
hrjxx(金幣+1): 謝謝啊，這個(gè)雙向的裂解液，用尿素卻區(qū)別在哪呢？ 2011-10-05 20:14:57
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-07 21:37:40
hrjxx(金幣+1): 這和這個(gè)裂解液的區(qū)別在哪呢（9M尿素，4%CHAPS) 2011-10-12 20:13:28
hrjxx(金幣+1): 謝謝啊，這個(gè)雙向的裂解液，用尿素卻區(qū)別在哪呢？ 2011-10-05 20:14:57
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-07 21:37:40
hrjxx(金幣+1): 這和這個(gè)裂解液的區(qū)別在哪呢（9M尿素，4%CHAPS) 2011-10-12 20:13:28
| 這個(gè)顯然是針對(duì)新鮮組織提取蛋白的方法呀 如果你是小顆粒樣品可以先用液氮研磨，然后加裂解液，再按照后面步驟勻漿。磷酸鹽緩沖液緩沖能力很強(qiáng)的，一般可溶性蛋白都沒(méi)問(wèn)題，實(shí)在不行你就要查查文獻(xiàn)，看看別人怎么玩的，這個(gè)具體原因要具體分析了…… |
2樓2011-10-04 12:51:55
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
hrjxx(金幣+1): 謝謝啊，雙向的裂解液里加尿素來(lái)溶解蛋白，和這個(gè)是一樣道理嗎？？ 2011-10-05 20:16:02
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-07 21:37:35
hrjxx(金幣+1): 謝謝啊，雙向的裂解液里加尿素來(lái)溶解蛋白，和這個(gè)是一樣道理嗎？？ 2011-10-05 20:16:02
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-07 21:37:35
磷酸緩沖液沒(méi)問(wèn)題的應(yīng)該是，主要是第一個(gè)問(wèn)題，你不能照搬你列舉的這個(gè)文獻(xiàn)，顯然材料處理方式不能一樣，提取液也可以根據(jù)你的材料不同而變化，此方法材料為鮮樣，用了較多蛋白酶抑制劑。。。。提取這東西嗎，隨意搞就好，當(dāng)然，也根據(jù)目的來(lái)，一般都是粉碎之類(lèi)的吧先 |
3樓2011-10-04 13:40:20
hrjxx
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5樓2011-10-12 20:15:02
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