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纖維素酶國標測定方法中的疑問,求指教
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在國標飼用《纖維素酶活性的測定 濾紙法》中,先加酶液和先加DNS有什么區(qū)別?在A0的測定中,先加DNS,接著加酶液,會導致酶不起作用嗎?還有為什么采用(A1-A0)確定糖含量,而不直接以A0作為空白直接測定A1?有區(qū)別嗎?謝謝指教: 8.3.2 在25 mL具塞比色管中加入濾紙條(5.8)--濾紙條須對襯剪成32片并全部放入,加1.0 mL檸檬酸鹽緩沖液(5.7)浸潤濾紙片,37℃水浴平衡10 min,再依次加入2.00 mL DNS試劑(5.9),0.50 mL酶液(8.3.1),5 mL水,電磁振蕩3 s-5 s,37℃水浴中保溫60 min(用秒表控制),然后再沸水浴中煮沸5 min,冷卻至室溫,用水定容至25 mL,在540 nm波長處測定校準值A0。 8.3.3 在25 mL具塞比色管中加入濾紙條(5.8)--濾紙條須對襯剪成32片并全部放入,加1.0 mL檸檬酸鹽緩沖液(5.7)浸潤濾紙片,37℃水浴平衡10 min,再依次加入0.50 mL酶液(8.3.1),5 mL水,電磁振蕩3 s-5 s,37℃水浴中保溫60 min(用秒表控制),加2.00 mL DNS試劑(5.9),然后再沸水浴中煮沸5 min,冷卻至室溫,用水定容至25 mL,在540 nm波長處測定吸光度A1。 |
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