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[求助] DNA電泳樣品都留在孔內(nèi)

求助高手，PCR產(chǎn)物電泳樣品都留在孔內(nèi)，沒(méi)有條帶。1.5%瓊脂糖，1乘的TAE。PCR產(chǎn)物理論長(zhǎng)度160bp。
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[ Last edited by wanhscn on 2011-10-27 at 10:39 ]

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1樓 2011-10-27 10:07:46

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會(huì)不會(huì)是瓊脂糖濃度太高，一般就是0.8—1左右吧

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2樓2011-10-27 11:11:21

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感覺(jué)像是PCR沒(méi)有進(jìn)行過(guò)，目的片段160bp，瓊脂糖1.5%是沒(méi)有問(wèn)題的。另外，如果你還有樣品，建議你是不是再跑一次，但在跑開(kāi)1cm的樣子就提早拍個(gè)照看看。本人出現(xiàn)過(guò)，跑的短條帶在，跑開(kāi)了，條帶失蹤的情況

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3樓2011-10-27 11:19:00

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首先，你跑了多長(zhǎng)時(shí)間，電壓多大？
如果都沒(méi)問(wèn)題，那就是你的PCR產(chǎn)物的問(wèn)題。還有留在孔洋的不一定是PCR產(chǎn)物

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4樓2011-10-27 11:50:58

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yu19841

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估計(jì)是在膠制好后，拔梳子的時(shí)候把膠孔處弄破了
你的PCR產(chǎn)物全部掉到點(diǎn)樣處，所有沒(méi)在膠上跑出來(lái)。

1.5%-2%的膠最容易拔破了

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5樓2011-10-27 12:36:00

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youngker918

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樓主應(yīng)該是沒(méi)有把產(chǎn)物擴(kuò)出來(lái)，加樣孔亮是正常的，不是有樣在

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天才就怕不夠天才，壞又不夠壞，天天都想離開(kāi)，卻不知何處才能換骨脫胎

6樓2011-10-27 14:44:46

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引用回帖:

6樓: Originally posted by youngker918 at 2011-10-27 14:44:46:
樓主應(yīng)該是沒(méi)有把產(chǎn)物擴(kuò)出來(lái)，加樣孔亮是正常的，不是有樣在

如果產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)出來(lái)，不至于連引物二聚體的條帶都沒(méi)有吧？

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7樓2011-10-27 15:17:39

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peace12039088

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引用回帖:

7樓: Originally posted by illcf_11 at 2011-10-27 15:17:39:
如果產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)出來(lái)，不至于連引物二聚體的條帶都沒(méi)有吧？

首先，我也認(rèn)為是產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)來(lái)。
如果產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)出來(lái)，就是可能在PCR體系配制時(shí)忘記加入了某種試劑，可能是Taq酶、可能是dNTps、也可能是少加了一條引物。那么，若是以上3種情況，應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槎垠w的吧。

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8樓2011-10-27 16:00:19

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引用回帖:

8樓: Originally posted by peace12039088 at 2011-10-27 16:00:19:
首先，我也認(rèn)為是產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)來(lái)。
如果產(chǎn)物沒(méi)有擴(kuò)出來(lái)，就是可能在PCR體系配制時(shí)忘記加入了某種試劑，可能是Taq酶、可能是dNTps、也可能是少加了一條引物。那么，若是以上3種情況，應(yīng)該不會(huì)出現(xiàn)因?yàn)槎垠w的吧。

同意��！所以說(shuō)是PCR沒(méi)有進(jìn)行呢

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9樓2011-10-27 16:03:34

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amisking(金幣+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2011-10-27 20:47:10

你的PCR儀沒(méi)有開(kāi)始吧，所以DNA根本就沒(méi)有跑？另外問(wèn)個(gè)問(wèn)題，你的膠上面有藍(lán)色的條帶嗎，它遠(yuǎn)離點(diǎn)樣孔嗎？如果有藍(lán)色條帶，那我前面的話就作廢

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10樓2011-10-27 17:09:18

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