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鯤鵬展翅新蟲 (初入文壇)
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[求助]
昆蟲RNA 提取！電泳圖，看不懂！請(qǐng)高手指點(diǎn)！
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用trizol法 提取小菜蛾體內(nèi)RNA ，marker是2000bp的！跑出來的電泳，不知道什么東西？ 除了什么原因？ （本實(shí)驗(yàn)室無分子實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，本人從0開始！悲催的！啥也不懂啊�。� 請(qǐng)各位高手指點(diǎn)！ |
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jukongka
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2樓2011-10-31 08:29:54
jukongka
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★
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-11-17 12:17:03
silicare(金幣+1): 謝謝參與 2011-11-17 12:17:03
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論壇里關(guān)于RNA提取的帖子： http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3212737&fpage=1 |
3樓2011-10-31 08:34:37
4樓2011-10-31 10:03:30
鯤鵬展翅
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silicare(金幣+4): 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖交流 2011-11-17 12:17:53
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是否為普通瓊脂糖電泳？ 如為普通的瓊脂糖凝膠電泳（檢測(cè)RNA）可以不用跑那么久。以下為我的電泳條件：（最好用RNA專用的電泳槽，新配電泳液。） 上樣量：小孔約200ng（中孔可上500-1000ng）1.5% gel， 約7-8V/cm，電泳15-20min(溴芬蘭跑離孔約2cm) EB染色5min。 提取過程嚴(yán)格按RNA操作要求操作。東西肯定要干凈這個(gè)不用說的了，另外注意一要快，二要低溫！ 可取些動(dòng)物肝臟多操作幾次練練手。 |
8樓2011-11-10 20:29:26
cyz20050505
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silicare(金幣+3): 謝謝參與 2011-11-17 12:18:15
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| 先用液氮研磨組織，組織別太多，研磨充分后（期間要一直有液氮保持低溫）將組織粉末連同未揮發(fā)完的液氮一并倒入玻璃勻漿器（預(yù)習(xí)加入troznl試劑，并置于冰上），然后直接磨其他組織，待化開后，開始勻漿，勻漿充分后就可以開始提取了。玻璃和鐵制器皿200度干烤3個(gè)小時(shí)，有機(jī)試劑不用處理，水必須是DEPC處理的水，EP管和槍頭最后買公司生產(chǎn)的RNase-free的管，沒有的話，也用DEPC處理。電泳變性不變性沒有影響，我甚至用普通的EP管裝RNA，也沒見它降解。根據(jù)我個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，前期研磨和勻漿是至關(guān)重要的一步。操作帶手套，口罩，穿大褂。 |
9樓2011-11-17 10:48:31
wansanlian
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10樓2012-05-09 13:15:51
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