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happyweit新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
有哪位高手western blotting做過(guò)MCF-7的cyclinB和cyclind1？ 已有2人參與
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| 我現(xiàn)在在做WB，細(xì)胞系是MCF-7R,但是跑過(guò)一次之后發(fā)現(xiàn)沒(méi)有曝出條帶來(lái)。。。因?yàn)樘崛〉鞍椎臅r(shí)候加裂解液體積大了一點(diǎn) 所以上樣量只有10ug, 另外我的抗體是santa cruz的抗人cyclin B和cyclinD1的抗體，1:500稀釋的 我想問(wèn)下有人做過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)嗎？我不知道這倆蛋白的表達(dá)量 是不是蛋白上樣量太少了引起的條帶出不來(lái)？或者有誰(shuí)用過(guò)這家的兩個(gè)抗體，稀釋比例一般是多少呢？ 感謝大家?guī)兔鉀Q~ |
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2樓2011-11-21 16:30:31
★ ★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-11-23 17:51:59
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-11-23 17:51:59
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我用過(guò)MCF-7，不過(guò)不是樓主做的蛋白~但是跟你遇到過(guò)同樣的問(wèn)題！santa和cell signaling technology的我都用了，明顯cell signaling的好用...這樣，你先確定二抗，是不是抗一抗來(lái)源的！我們這邊有個(gè)小丫頭就是做了好久，最后發(fā)現(xiàn)是二抗的問(wèn)題...還有就是，我建議你用進(jìn)口的顯色劑，我曾經(jīng)有3個(gè)月沒(méi)做出條帶，最后換了Pierce的顯色劑，目的條帶全出來(lái)了...說(shuō)實(shí)話，樓主你的蛋白量確實(shí)太少了...我一般都要上60ug的... 一抗的稀釋比例一般都是1：500-1:1000，應(yīng)該不是樓主你稀釋的問(wèn)題~ |
3樓2011-11-23 15:58:43
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