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happyweit新蟲 (初入文壇)
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[交流]
有哪位高手western blotting做過MCF-7的cyclinB和cyclind1？ 已有2人參與
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| 我現(xiàn)在在做WB，細胞系是MCF-7R,但是跑過一次之后發(fā)現(xiàn)沒有曝出條帶來。。。因為提取蛋白的時候加裂解液體積大了一點 所以上樣量只有10ug, 另外我的抗體是santa cruz的抗人cyclin B和cyclinD1的抗體，1:500稀釋的 我想問下有人做過相關實驗嗎？我不知道這倆蛋白的表達量 是不是蛋白上樣量太少了引起的條帶出不來？或者有誰用過這家的兩個抗體，稀釋比例一般是多少呢？ 感謝大家?guī)兔鉀Q~ |
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2樓2011-11-21 16:30:31
★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+1): 鼓勵應助 2011-11-23 17:51:59
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+1): 鼓勵應助 2011-11-23 17:51:59
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我用過MCF-7，不過不是樓主做的蛋白~但是跟你遇到過同樣的問題！santa和cell signaling technology的我都用了，明顯cell signaling的好用...這樣，你先確定二抗，是不是抗一抗來源的！我們這邊有個小丫頭就是做了好久，最后發(fā)現(xiàn)是二抗的問題...還有就是，我建議你用進口的顯色劑，我曾經(jīng)有3個月沒做出條帶，最后換了Pierce的顯色劑，目的條帶全出來了...說實話，樓主你的蛋白量確實太少了...我一般都要上60ug的... 一抗的稀釋比例一般都是1：500-1:1000，應該不是樓主你稀釋的問題~ |
3樓2011-11-23 15:58:43
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