 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5175 | 回復(fù): 31 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
joan198108鐵桿木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
用過pET28a(+)表達(dá)載體的高人請指教
|
|||
|
本人合成了一段全基因序列，連接表達(dá)載體pET28a(+)，因?yàn)榈谝淮巫�，錯(cuò)誤的選擇了EcoR1和Hind3作為酶切位點(diǎn)（紅色標(biāo)記），這樣表達(dá)出的目的蛋白就會(huì)帶有大量的載體氨基酸（藍(lán)色框），影響活性。不知道哪位高人能夠指點(diǎn)一些，該怎樣處理才能保證蛋白活性？謝謝�。� |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 生物技術(shù) | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有139人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 怎樣將生物膜從載體上取下來？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 分子模擬超分子聚集，求指教！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- PET-28a載體怎么解讀
已經(jīng)有7人回復(fù)
- pET28a載體蛋白表達(dá)為包涵體
已經(jīng)有5人回復(fù)
- pET-30a(+)不表達(dá)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- pET28a載體和目的基因
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于稀有密碼子的優(yōu)化，請求大家指教
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 有用過transgen 的t1載體的嗎
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 構(gòu)建了個(gè)基因的表達(dá)載體，發(fā)現(xiàn)有一個(gè)氨基酸發(fā)生突變
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 關(guān)于WSK和PETS5的一些初級(jí)困惑
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 麻煩半導(dǎo)體方面的高人幫我講講德拜長度。
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 急求~大蝦指教，MVSP 中 CCA 分析中的分析結(jié)果和分析圖，是什么意思
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 南京質(zhì)檢局下屬事業(yè)單位食品檢測崗位面試，懇請大家指教
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】有誰用過載體pEASY-E1Expression kit 這個(gè)載體
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PEt-28a質(zhì)粒載體表達(dá)蛋白質(zhì)的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】pET-28a的酶切位點(diǎn)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】同尾酶構(gòu)建載體問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】連接表達(dá)載體PET-28A失敗原因
已經(jīng)有23人回復(fù)
月月大可
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 3272.1
- 散金: 1393
- 紅花: 17
- 帖子: 1674
- 在線: 295.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 549127
- 注冊: 2008-04-20
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-13 19:03:38
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-13 19:03:38
|
我一般使用Nde I酶切位點(diǎn)，這是能發(fā)揮his tag 功能又盡可能減少外援氨基酸的最優(yōu)做法。但蛋白親和層析階段我還可以使用 凝血酶 將N段的his tag 切除。這樣相當(dāng)于同時(shí)進(jìn)行了親和層析純化后再使用蛋白酶進(jìn)行特異選擇，一步下來即可獲得極高純度的目的蛋白。 看了樓主的回復(fù)，感覺是個(gè)外行人（我說話直）。 僅僅重新設(shè)計(jì)引物，更換酶切位點(diǎn)即可。不知道你在下游引入終止密碼子沒有，如果沒有引入，這樣目的蛋白就會(huì)在兩端都帶標(biāo)簽。 如果你根本不想用his tag，僅僅是用載體表達(dá)，你可以把上游酶切位點(diǎn)用Nco I。 |
21樓2011-12-12 19:56:58
shaquila
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 1484.8
- 散金: 59
- 紅花: 14
- 帖子: 553
- 在線: 182.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 654839
- 注冊: 2008-11-15
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
joan198108(金幣+2): 2011-12-12 16:29:40
joan198108(金幣+2): 2011-12-12 16:29:40
|
重新構(gòu)建吧，要除去這個(gè)貌似要酶切啥的 另外，一般這些tag對活性不會(huì)有非常大的影響？ |
joan1981082樓2011-12-12 16:15:36
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2011-12-12 16:17:44
海豚榮
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 8364.5
- 紅花: 2
- 帖子: 2250
- 在線: 100.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1149241
- 注冊: 2010-11-17
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2011-12-12 16:27:08
joan198108
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 107 (高中生)
- 金幣: 6525.2
- 散金: 12
- 紅花: 3
- 帖子: 842
- 在線: 413.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 859607
- 注冊: 2009-09-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
5樓2011-12-12 16:29:27
joan198108
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 107 (高中生)
- 金幣: 6525.2
- 散金: 12
- 紅花: 3
- 帖子: 842
- 在線: 413.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 859607
- 注冊: 2009-09-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
6樓2011-12-12 16:30:59
joan198108
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 107 (高中生)
- 金幣: 6525.2
- 散金: 12
- 紅花: 3
- 帖子: 842
- 在線: 413.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 859607
- 注冊: 2009-09-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
7樓2011-12-12 16:32:59
shaquila
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 1484.8
- 散金: 59
- 紅花: 14
- 帖子: 553
- 在線: 182.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 654839
- 注冊: 2008-11-15
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
8樓2011-12-12 16:35:59
小小亞杰
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 42 (小學(xué)生)
- 金幣: 3175.9
- 散金: 1032
- 紅花: 4
- 帖子: 542
- 在線: 57.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1485167
- 注冊: 2011-11-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2011-12-12 16:43:43
joan198108
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 107 (高中生)
- 金幣: 6525.2
- 散金: 12
- 紅花: 3
- 帖子: 842
- 在線: 413.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 859607
- 注冊: 2009-09-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
10樓2011-12-12 17:06:04
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 joan198108 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +5 | Zhao anqi 2026-03-22 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿中南化學(xué)（0703）總分337求調(diào)劑 +9 | niko- 2026-03-19 | 10/500 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +3 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 勇敢的小吳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +3 | 余意卿 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 華東師范大學(xué)-071000生物學(xué)-293分-求調(diào)劑 +3 | 研究生何瑤明 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)求調(diào)劑 +4 | Stella_Yao 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|