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[交流]
核糖體結(jié)合位點(diǎn)與ATG起始密碼子的距離問題
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| 我最近目的基因連接一個(gè)表達(dá)載體，在細(xì)菌中表達(dá)，ATG起始位點(diǎn)離載體核糖體結(jié)合位點(diǎn)20bp左右，會不會影響我的目的基因的表達(dá)呢？ |
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 【分子生物】EPI帖 | 核酸方面 | 博士學(xué)習(xí) |
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西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good！辛苦啊！ 2011-12-13 18:59:05
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RBS你認(rèn)為的是哪個(gè)？是寫有RBS的上方嗎？如果是，我認(rèn)為那2個(gè)基因的RBS 99%是錯(cuò)的。 GGATAACAATTTCACACAGGAAACAGAATTCGAGCTCATG目的基因 第一個(gè)下劃線最像RBS序列，spacer長9~14，spacer雖然有點(diǎn)長，但翻譯一般不會有問題；第二個(gè)下劃線稍微像RBS序列，spacer長2，spacer有點(diǎn)過短，翻譯可能很差；總之，這個(gè)序列翻譯應(yīng)該不成問題。 GGATAACAATTTCACACAGGAAACAGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTATG+目的基因 第一個(gè)下劃線最像RBS序列，spacer長22~27，spacer有點(diǎn)長，翻譯效率會下降較多；第二個(gè)下劃線稍微像RBS序列，spacer長約15，spacer有點(diǎn)長，因?yàn)镽BS序列也不太好，翻譯可能很差；第三個(gè)下劃線比較像RBS序列，但spacer有點(diǎn)過短，翻譯可能不太好；總之，這個(gè)序列翻譯效率可能比上面那個(gè)基因差甚至檢測不到。 排除promoter因素，從RBS看，第一個(gè)應(yīng)該問題不大，第二個(gè)有點(diǎn)困難。這些是推測，還得看你實(shí)際實(shí)驗(yàn)結(jié)果，畢竟微生物的種間差異很大，不能妄下定論。結(jié)果出來后望告知。 |
7樓2011-12-13 16:04:47
2樓2011-12-12 21:54:13
3樓2011-12-12 22:34:06
胡武佳4樓2011-12-13 07:40:07
5樓2011-12-13 11:05:04
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其中一個(gè)基因RBS附近序列： ATTCTGAAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGC SalI XmaIII SstI NotI SacI Eco52I Ecl136II EagI EcoRI EcoICRI GGATAACAATTTCACACAGGAAACAGAATTCGAGCTCATG目的基因 RBS 另一個(gè)基因RBS附近序列： ATTCTGAAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCGGCTCGTATAATGTGTGGAATTGTGAGC SalI XmaIII SstI NotI SacI Eco52I Ecl136II EagI EcoRI EcoICRI HindIII XhoI GGATAACAATTTCACACAGGAAACAGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTATG+目的基因 RBS |
6樓2011-12-13 11:07:38
8樓2011-12-13 18:21:18
9樓2011-12-13 22:12:57
10樓2011-12-14 22:02:31
11樓2018-08-08 19:36:51
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