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旋之木新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助高手,我用手提的土壤DNA,用什么方法純化
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| 我用手提的土壤總DNA,之前用過切膠回收,但是切膠回收的產(chǎn)物做PCR效果不好。用soilmaster DNA 純化效果還不錯(cuò),但是再買說已經(jīng)停產(chǎn)了,不知道有沒有其他好的純化方法,求高手指教~~~ |
金蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
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方法我給你,我自己總結(jié)用電子天平分別稱取土樣各3g于磨口三角燒瓶內(nèi) 用移液槍分別移取6mLDNA提取液加入到三角燒瓶內(nèi) 從冰箱中取出蛋白酶K和溶菌酶放在手心焐熱至溶化 用移液槍分別移取500uL和20uL溶菌酶和蛋白酶K于三角燒瓶內(nèi),然后塞上空心塞置于37℃恒溫?fù)u床上振蕩30min,然后取出置于37℃恒溫水浴鍋內(nèi)水浴1小時(shí)。 待水浴結(jié)束后分別加入1mL20%的SDS溶液,再將其置于65℃恒溫水浴鍋內(nèi)水浴2小時(shí) 待水浴結(jié)束后,取出分別加入2.51mL的6mol/L的氯化鈉溶液劇烈振蕩,倒入離心管12000r/min離心15分鐘 取上清液將其分成3分每份均取0.4mL置于滅過菌的離心管內(nèi),然后加入0.4mL的苯酚:氯仿:異戊醇=25:24:1的溶液,然后12000r/min離心5分鐘 離心后取上清液加入等體積的氯仿:異丙醇=24:1的溶液然后置于離心機(jī)12000r/min離心5分鐘 取出上清液加入2倍提及的無水乙醇室溫下沉淀20~30分鐘 待沉淀完12000r/min離心10分鐘 棄去上清液加入200uL的TE緩沖液使沉淀溶解 放置在-20℃冰箱保存出來的,效果還不錯(cuò)的!方法步驟如下: |
新蟲 (初入文壇)
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