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旋之木新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助高手，我用手提的土壤DNA，用什么方法純化
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| 我用手提的土壤總DNA，之前用過(guò)切膠回收，但是切膠回收的產(chǎn)物做PCR效果不好。用soilmaster DNA 純化效果還不錯(cuò)，但是再買說(shuō)已經(jīng)停產(chǎn)了，不知道有沒有其他好的純化方法，求高手指教~~~ |
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yaoyl0679
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2樓2011-12-18 11:36:52
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amisking(應(yīng)助指數(shù)-1): 2011-12-18 17:56:52
amisking:編輯內(nèi)容 2011-12-18 17:57
amisking(應(yīng)助指數(shù)-1): 2011-12-18 17:56:52
amisking:編輯內(nèi)容 2011-12-18 17:57
 本帖僅樓主可見 |
3樓2011-12-18 12:21:21
旋之木
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4樓2011-12-18 20:46:03
【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+3): good 2011-12-19 09:49:23
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zhang8826857(金幣+3): good 2011-12-19 09:49:23
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方法我給你，我自己總結(jié)用電子天平分別稱取土樣各3g于磨口三角燒瓶?jī)?nèi) 用移液槍分別移取6mLDNA提取液加入到三角燒瓶?jī)?nèi) 從冰箱中取出蛋白酶K和溶菌酶放在手心焐熱至溶化 用移液槍分別移取500uL和20uL溶菌酶和蛋白酶K于三角燒瓶?jī)?nèi)，然后塞上空心塞置于37℃恒溫?fù)u床上振蕩30min，然后取出置于37℃恒溫水浴鍋內(nèi)水浴1小時(shí)。 待水浴結(jié)束后分別加入1mL20%的SDS溶液，再將其置于65℃恒溫水浴鍋內(nèi)水浴2小時(shí) 待水浴結(jié)束后，取出分別加入2.51mL的6mol/L的氯化鈉溶液劇烈振蕩，倒入離心管12000r/min離心15分鐘 取上清液將其分成3分每份均取0.4mL置于滅過(guò)菌的離心管內(nèi)，然后加入0.4mL的苯酚：氯仿：異戊醇=25：24：1的溶液，然后12000r/min離心5分鐘 離心后取上清液加入等體積的氯仿：異丙醇=24：1的溶液然后置于離心機(jī)12000r/min離心5分鐘 取出上清液加入2倍提及的無(wú)水乙醇室溫下沉淀20~30分鐘 待沉淀完12000r/min離心10分鐘 棄去上清液加入200uL的TE緩沖液使沉淀溶解 放置在-20℃冰箱保存出來(lái)的，效果還不錯(cuò)的！方法步驟如下： |
5樓2011-12-18 22:18:23
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9樓2011-12-20 11:48:33
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