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pyflxxx新蟲 (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)提取全血DNA和RNA問(wèn)題。 已有1人參與
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你好，本人新人，即將開始提取人全血RNA和DNA。 DNA用tiangen的盒子，RNA用TRIZOL提取。 DNA用于SNP基因分型。RNA用于做些病原學(xué)檢測(cè)。 想請(qǐng)問(wèn)：用于提取DNA的全血需要加多少ml樣本量才夠？ RNA呢？ 另外同時(shí)提取實(shí)在分身無(wú)術(shù)，如果第一天提取RNA，凍-80里，第二天再提取DNA有影響嗎？ RNA反轉(zhuǎn)錄和組織試劑反轉(zhuǎn)錄是一樣的么？ 謝謝了。 |
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pyflxxx
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 流行病學(xué)方法與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)
2樓2011-12-22 13:36:36
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2011-12-22 18:29:52
amisking: 回帖置頂 2011-12-22 18:29:54
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你可以參考一下Qiagen 有關(guān)blood DNA 的kit 里面有介紹。 如200ul 全血的DNA產(chǎn)量在5-12ug左右。而1ml 的新鮮全血RNA含量在1-3ug左右�？茨愫罄m(xù)實(shí)驗(yàn)需要的用量決定使用多少全血，不過(guò)血液的核酸含量也會(huì)因人而有所差異，再加上所使用的提取方法也有一個(gè)效率問(wèn)題，如果血液充足建議多用一點(diǎn)。 如果你的血液是加了抗凝劑的，第一天提RNA，剩余的血液可以放4度冰箱，第二天用來(lái)提DNA完全沒(méi)問(wèn)題。因?yàn)檠撼煞輳?fù)雜，且其中的RNA含量少，所以采血后請(qǐng)盡快提RNA。不過(guò)你說(shuō)用Trizol提可能會(huì)受體積限制（1ml Trizol處理100ul液體）。 |
3樓2011-12-22 17:00:09
4樓2011-12-22 17:09:37
【答案】應(yīng)助回帖
| Trizol可以用于提取RNA,但是屬于化學(xué)試劑，具有一定的毒性。Trizol和全血樣本的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血�；靹蛑蠓胖�10分鐘左右，直接加三氯甲烷混勻再去離心，可以不用先離心去沉淀之后再加三氯甲烷。我們實(shí)驗(yàn)室用BIOG RNA BLOOD ISOLATE KIT離心技術(shù)提取RNA比Trizol要簡(jiǎn)便些,樓主需要注意如果用Trizol每個(gè)步驟操作要快，用的時(shí)間藥短些，防止RNA降解,異丙醇沉淀的時(shí)候，放-20°C的冰箱半個(gè)小時(shí)，或再適當(dāng)延長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。迅速離心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易損失部分RNA。不要過(guò)分干燥，管內(nèi)稍有點(diǎn)殘余的乙醇也沒(méi)關(guān)系。干燥一會(huì)就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反轉(zhuǎn)錄成cDNA再保存。還有你說(shuō)的第一天提取RNA，凍-80里，第二天再提取DNA我個(gè)人覺得是沒(méi)什么影響 |
5樓2019-03-21 09:08:32
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