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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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蘇南81

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[求助] TD-PCR 退火溫度及程序的設(shè)計(jì)

求助：我在做TD-PCR 所用引物的Tm值分別為52.18和63.95。
我的退火溫度和程序應(yīng)該怎么設(shè)計(jì)？
之前做過(guò)一部分預(yù)實(shí)驗(yàn)（退火58-53），只是出現(xiàn)隱約的目的條帶，且非特異和彌散很?chē)?yán)重，原因是什么？

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1樓 2012-01-02 11:28:55

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susizheng

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【答案】應(yīng)助回帖

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zhang8826857(金幣+1): 我最近也需要做pcr，設(shè)置梯度是個(gè)好辦法啊 2012-01-03 13:21:21

試試50-65，設(shè)置15個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)1℃的梯度，再50攝氏度15-20個(gè)循環(huán)。

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Thank-you，so-blue.

2樓2012-01-02 12:47:36

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蘇南81

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引用回帖:

樓: Originally posted by susizheng at 2012-01-02 12:47:36:
試試50-65，設(shè)置15個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)1℃的梯度，再50攝氏度15-20個(gè)循環(huán)。

謝謝！試過(guò)了，結(jié)果不好。

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3樓2012-01-02 19:15:25

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老夏853

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把你目標(biāo)片段大小還有退火時(shí)間跟延伸時(shí)間發(fā)上來(lái)看看

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4樓2012-01-04 10:10:24

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樓: Originally posted by 老夏853 at 2012-01-04 10:10:24:
把你目標(biāo)片段大小還有退火時(shí)間跟延伸時(shí)間發(fā)上來(lái)看看

片段大�。�900bp，退火45s，延伸90s

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守候幸福

5樓2012-01-04 11:54:51

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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2012-01-04 16:59:15

同意二樓的說(shuō)法 65- 50
不過(guò)建議最后的20個(gè)循環(huán)退火溫度稍微高一點(diǎn)，一般是普通pcr 的退火溫度，
另外彌散可能是模板降解或者模板濃度過(guò)大引起的
檢測(cè)模板質(zhì)量并且稀釋模板做梯度試驗(yàn)。

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6樓2012-01-04 13:32:02

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