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[求助]
提RNA反轉(zhuǎn)錄后，用GAPDH和TLR進(jìn)行PCR，可是GAPDH條帶很亮，TLR怎么都出不來(lái)
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各位大俠，我最近提了RAW264.7細(xì)胞的RNA，反轉(zhuǎn)錄后，用GAPDH和TLR進(jìn)行PCR，可是GAPDH條帶很亮，TLR怎么都出不來(lái)。 第一次加了6微升DEPC水溶解RNA，然后取5微升RNA溶液作RT-PCR（20微升體系），再分別用GAPDH和TLR2進(jìn)行PCR。 圖見(jiàn)1 第二次取500ng 小鼠肺組織、RAW264.7細(xì)胞的總RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)，用的是M-MLV的酶，按照protocol上的10微升體系，在用TLR1和GAPDH進(jìn)行PCR。結(jié)果還是只有很亮的GAPDH，不過(guò)兩次PCR都有很多引物二聚體。 見(jiàn)圖2 誰(shuí)能告訴我這到底是為什么呀~~~ 1 MARKER 1RAW(GAPDH tlr2) 2RAW(GAPDH tlr2) 2 MARKER TLR1(肺 1RAW 2RAW) GAPDH(肺 1RAW 2RAW).jpg |
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4樓2012-01-08 10:59:05
lihegang2000
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2012-01-08 09:36:37
3樓2012-01-08 10:23:36
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5樓2012-01-08 12:44:06
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