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shenxing325銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助，Western-Blot轉(zhuǎn)膜不成功
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各位蟲友，做了兩次Western-Blot轉(zhuǎn)膜都不成功，想各位幫我指點(diǎn)一下可能的原因，這些是我做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候的條件細(xì)節(jié)： 目的蛋白大小100kD左右，用的是濕轉(zhuǎn)法，電轉(zhuǎn)緩沖液（5×）的配方是： Glycine 15.1g Tris 72g SDS 5g 定容至一升，使用前取200mL，再加700mL水和100mL甲醇，4度備用 濾紙（3mm濾紙用兩邊各用兩層）比膜和膠大比較多，之前看過(guò)一些人說(shuō)濾紙要比膜小，但是好像大多數(shù)人都說(shuō)對(duì)于濕轉(zhuǎn)來(lái)說(shuō)沒(méi)有關(guān)系。 膜用的是0.45um的PVDF膜，這個(gè)有人說(shuō)要用0.22um的，是這樣嗎？ 電轉(zhuǎn)于4度冰柜中進(jìn)行，80V電壓，時(shí)間2h，用立春紅染色，但是什么都沒(méi)有，我沒(méi)有用預(yù)染Marker。 看大多數(shù)人都說(shuō)濕轉(zhuǎn)是非常容易成功的，我的實(shí)驗(yàn)操作哪里有問(wèn)題嗎？請(qǐng)指教，謝謝！ |
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山東老杜
木蟲 (正式寫手)
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