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liangyou鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于測定植物CAT的問題
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本人用紫外分光光度法中的連續(xù)記錄法測定過氧化氫酶的活力，但是每隔30秒測得的值如下：1.520，1.520，1.515，1.517，1.519，1.518。 測了近百組數(shù)據(jù)，都是這樣的不穩(wěn)定，而且變化值極小，POD和SOD數(shù)據(jù)測出來還都是正常的，可不可以求助一下大家，為什么會出現(xiàn)這個情況！ |
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starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
liangyou(金幣+10): ★★★很有幫助 我要去看看實驗真正的結(jié)果，可不可以把你的實驗方案發(fā)給我下啊，謝謝了！ 2012-01-27 00:43:21
amisking(APEPI+1): 鼓勵積極應(yīng)助！ 2012-01-27 17:38:07
liangyou(金幣+10): ★★★很有幫助 我要去看看實驗真正的結(jié)果，可不可以把你的實驗方案發(fā)給我下啊，謝謝了！ 2012-01-27 00:43:21
amisking(APEPI+1): 鼓勵積極應(yīng)助！ 2012-01-27 17:38:07
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你的CAT反應(yīng)液組成是什么？加入粗酶液后有沒充分混合？ 你可以按照不安的-heart 的建議試試，但你同時在棉花與龍葵中遇到這樣的問題，我懷疑還有別的某步操作有問題。 我過去做黃花蒿植株及發(fā)根的CAT檢測，方法參考Zhou B et al. J Exp Bot, 2005, 56: 3223-3228 酶提�。喝〔煌幚淼男迈r黃花蒿發(fā)根0.500 g，在4 ml預(yù)冷的磷酸鉀酶提取緩沖液中冰浴研磨，10000 r/min 4℃離心15 min，取上清液作為酶待測液。 檢測：取0.1 ml待測酶液，加入0.05 mol/l pH 7.0磷酸鉀緩沖液1.4 ml，40 mmol/l H2O2 1.5 ml，立即計時，測定波長240 nm處吸光度值，每隔30 s讀數(shù)一次，共測定4 min。以不含酶待測液作為空白對照。CAT活力以ΔA240/Δt=0.001/min為一個酶活力單位（U），比活力為U/mg蛋白。 （磷酸鉀酶提取緩沖液：0.05 mol/l pH 7.0磷酸鉀緩沖液中，含1%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮，1 mmol/l苯甲磺酰氯，1 mmol/l EDTA，1mmol/l DTT與0.2% Triton X-100。） |
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小精靈12
11樓2012-01-20 22:20:39
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6樓2012-01-20 14:46:27
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8樓2012-01-20 18:07:48
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9樓2012-01-20 20:46:52
liangyou
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10樓2012-01-20 20:55:26
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