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劉仕博金蟲 (著名寫手)
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在克隆的時(shí)候你遇見過這樣的問題嗎？
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| 最近在做RACE的克隆，有兩個(gè)基因的5‘?dāng)嘣赑CR的時(shí)候只有400bp左右的長(zhǎng)度，回收產(chǎn)物做克隆之后菌液的序列長(zhǎng)度就變成了1000多，拿去測(cè)序的結(jié)果卻什么都沒有，上游引物和下游引物中間就只有個(gè)AC，連續(xù)做了兩次結(jié)果都是一樣的，請(qǐng)問這是什么原因造成的呢？ |
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blackrose8089
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4樓2012-02-02 14:28:30
amilie030312
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2樓2012-02-02 12:59:33
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2012-02-02 18:31:13
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這個(gè)應(yīng)該是沒連上，也就是實(shí)驗(yàn)失敗了。 這種情況我遇到過，酶切鑒定跟我的片段一樣大小，可是拿去測(cè)序測(cè)出來什么都不是。 你的測(cè)序引物沒什么問題的話就重新做吧。 重點(diǎn)檢查一下你的感受態(tài)，以及你的純化試劑盒。都沒問題的話，直接拿你的PCR回收產(chǎn)物去測(cè)序吧，看一下是不是一個(gè)錯(cuò)配片段。 好運(yùn)。 |
3樓2012-02-02 13:32:23
hooter86
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5樓2012-02-02 16:57:05
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