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willy0805

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[求助] DNA提取測(cè)序，DNA提取后，電泳條帶彌散拖尾

提取基因組DNA用于PCR擴(kuò)增后測(cè)序鑒定。DNA提取后電泳發(fā)現(xiàn)拖帶和彌散嚴(yán)重，請(qǐng)高手分析下原因和解決方法

右1為marker，右2和4為樣品，3和5為稀釋樣

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1樓 2012-02-15 10:32:25

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【答案】應(yīng)助回帖

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如果材料不是很特別的話(huà)，不是材料問(wèn)題的話(huà)，重新按要求配制新的提取液吧。

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我的blog：http://vipbio.bokee.com

2樓2012-02-15 16:01:59

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amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2012-02-15 20:24:36

提取基因組DNA出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象很正常，不知道你用的是試劑盒提取還是其他方法。從圖上看點(diǎn)樣孔下面貌似有一個(gè)條帶，應(yīng)該是基因組DNA，可以做PCR試試看看目標(biāo)條帶能不能P出來(lái) 祝好運(yùn)

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3樓2012-02-15 16:13:19

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應(yīng)該是里邊殘余的RNA條帶吧。另外點(diǎn)樣孔里有條帶，建議抽提的時(shí)候少抽點(diǎn)

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4樓2012-02-15 19:04:38

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thaw

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【答案】應(yīng)助回帖

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可能是降解了我提過(guò)做SOUTHERN的，沒(méi)問(wèn)題

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5樓2012-02-15 20:32:54

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用的是試劑盒提的，真菌材料，接下來(lái)該做PCR了，不知道這樣可以做么，還是要重新提下DNA?處理樣品時(shí)沒(méi)用液氮研磨，普通研磨的，不知道有沒(méi)有影響？

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6樓2012-02-16 09:19:38

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longrna

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正常來(lái)說(shuō)，這樣的基因組DNA提取結(jié)果我覺(jué)得不可以。
1、點(diǎn)樣孔有很明顯的殘留。可能是蛋白或其他雜質(zhì)沒(méi)去除干凈。
2、不但彌散太嚴(yán)重，還沒(méi)有>=23kb的主帶。

建議多注意點(diǎn)操作重提吧。強(qiáng)大的材料可以不液氮研磨，真菌還是液氮一下吧。
其實(shí)真菌不好做...

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偉大航線(xiàn)....

7樓2012-02-16 12:56:31

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PCR結(jié)束后可以加一點(diǎn)RNA酶，把RNA降解掉，不管有沒(méi)有RNA都加上，這樣就可以排除RNA的影響了

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生命在于運(yùn)動(dòng)

8樓2013-04-09 23:26:34

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