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沁雪飄逸新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
怎么測(cè)定氨基氮的轉(zhuǎn)化率?
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怎么測(cè)定氨基氮的轉(zhuǎn)化率?求方法? 月桂酰氯與多肽聚合物反應(yīng)后怎么測(cè)定其轉(zhuǎn)化率?我想測(cè)定氨基氮的轉(zhuǎn)化率,可是暫時(shí)沒(méi)想到方法,求解? |
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arokas
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2樓2012-02-19 20:12:13
arokas
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【答案】應(yīng)助回帖
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氨氮測(cè)定 （發(fā)酵液中氨氮含量通過(guò)酚-次氯酸法） （1）容器的清洗：所有配制試劑的容器都用重鉻酸鉀洗液浸洗后清水沖洗干凈，并用去離子水潤(rùn)洗三次烘干。 （2）試劑的配制：所有試劑都用超純水配制。 試劑A：苯酚10 g/L，亞硝基鐵氰化鈉•2H2O 100 mg/L，37℃時(shí)實(shí)測(cè)pH為7.5-7.8。4℃避光可存30天以上。 試劑B-Ⅰ：緩沖溶液體系分別含有0.4 M Na2HPO4和0.2 M NaOH，37℃時(shí)實(shí)測(cè)pH為11.5-11.6。室溫存放不超過(guò)60天。 試劑B-Ⅱ：以NaClO成品溶液（標(biāo)示活性氯≥5.2%）配制NaOH溶液。NaOH含量為 2 mol/L。 試劑B：試劑B-Ⅱ：試劑B-Ⅰ=1:100 (v/v), 37℃時(shí)實(shí)測(cè)pH約為11.50-11.70，混合搖勻備用，配置后于4℃可保存14天。 銨標(biāo)準(zhǔn)液貯存液：稱(chēng)取3.819 g經(jīng)100oC干燥過(guò)的優(yōu)級(jí)純氯化銨溶解于水中，移入1000 mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線（溶液濃度為 1.00 mg氨基氮/mL)。 （3）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 將銨標(biāo)準(zhǔn)貯存液進(jìn)行一系列稀釋?zhuān)謩e為100倍、50倍、40倍、20倍、10倍。依次加入20 μL標(biāo)準(zhǔn)溶液（系列濃度梯度稀釋后），2.5 mL的試劑A和2.5 mL的試劑B，10s內(nèi)立即搖勻，于37oC水浴中保溫30 min，取出于630nm處比色測(cè)定，蒸餾水調(diào)零（20 min內(nèi)完成全部測(cè)定）。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖2.1，在氨氮檢測(cè)劑量0-2 μg內(nèi)，氨氮含量和A630nm間有很好的線性相關(guān)性。 標(biāo)樣濃度（N mg/mL） 0 0.01 0.02 0.025 0.05 0.1 1 取液量（定容10mL） 0 0.1 0.2 0.25 0.5 1 10 標(biāo)品測(cè)定量（µg） 0 1 4 6.25 25 100 10000 A630nm 以標(biāo)品測(cè)定量（µg）為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光值A(chǔ)630nm為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并回歸如下方程式： Y=AX+B，其中R2應(yīng)大于0.99。 （4）樣品測(cè)定 將待測(cè)樣品于10,000×g 4°C離心5 min，取無(wú)油脂上清液進(jìn)行測(cè)定。 根據(jù)待測(cè)樣品中大概氨氮含量，對(duì)樣品系列稀釋?zhuān)ㄏ♂尡稊?shù)n為1,10,100,1000）。于試管中依次加入20 μL樣品稀釋液，2.5 mL的試劑A和2.5 mL的試劑B，10s內(nèi)立即搖勻，于37oC水浴中保溫30-50 min，取出于630 nm處比色測(cè)定，蒸餾水調(diào)零�？瞻讟悠坊旌弦何庵祽�(yīng)為0.010-0.040（這決定于所用試劑的質(zhì)量以及蒸餾水的純度）。計(jì)算公式如下所示： 其中，AN為樣品中的氨氮濃度(g/L)；n為樣品稀釋倍數(shù)，A630 nm為樣品在630 nm下的吸光值，A和 B為標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸公式中的系數(shù)。當(dāng)A630 nm測(cè)定數(shù)值在0.08-0.8范圍所對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)為有效稀釋倍數(shù)，如不在此范圍內(nèi)可調(diào)節(jié)樣品的稀釋倍數(shù)，使測(cè)量值在此范圍內(nèi)）。 |
3樓2012-02-19 20:12:54
沁雪飄逸
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5樓2012-02-22 11:19:45
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