 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3558 | 回復(fù): 11 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
joyjane88銅蟲 (初入文壇)
|
[交流]
PCR擴(kuò)增法制備低拷貝質(zhì)粒（替代常規(guī)質(zhì)粒提�。� 已有8人參與
|
|||
| 大家好，近期構(gòu)建一載體，但所用出發(fā)載體質(zhì)粒是低拷貝的（約20個(gè)copies），但不是很大（5-6K）。每次用小提試劑盒提取得到的樣品量很低（10-20ng/ul），很不利于后期的酶切連接及轉(zhuǎn)化。本人想通過(guò)pcr的方法擴(kuò)增來(lái)制備這個(gè)質(zhì)粒（制備量應(yīng)該可以達(dá)到50ng/ul以上，而且可以擴(kuò)增好多管），但沒(méi)有查到相關(guān)的方法（有用PCR擴(kuò)增制備定點(diǎn)突變質(zhì)粒的，但沒(méi)有看到制備常規(guī)質(zhì)粒的PCR）。想問(wèn)問(wèn)大家可行嗎？歡迎大家給出寶貴意見(jiàn)。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) |
» 猜你喜歡
299求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿北京理工大學(xué)本科211材料工程294求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
招收生物學(xué)/細(xì)胞生物學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
070305高分子化學(xué)與物理 304分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
289求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
調(diào)劑求院校招收
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
調(diào)劑310
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 全質(zhì)粒PCR引物設(shè)計(jì)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 菌液PCR是陽(yáng)性，卻提不出來(lái)陽(yáng)性質(zhì)粒！求助
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 怎么區(qū)分質(zhì)粒是低拷貝還是高拷貝
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 質(zhì)粒DNA提取成了這樣，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌?/a>
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒PCR產(chǎn)物的回收（質(zhì)粒構(gòu)建）
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】做過(guò)大引物全質(zhì)粒PCR的進(jìn)來(lái)看
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品制備及拷貝數(shù)計(jì)算
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR擴(kuò)增模板精確定量:兩個(gè)拷貝or三個(gè)拷貝的試驗(yàn)方法
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】重組質(zhì)粒PCR的taq酶選擇！
已經(jīng)有11人回復(fù)
AnaSequence
金蟲 (小有名氣)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 593.3
- 散金: 4
- 帖子: 120
- 在線: 58.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1549759
- 注冊(cè): 2011-12-24
- 專業(yè): 生物信息學(xué)
7樓2012-02-22 19:13:16
liuyu_sdili
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應(yīng)助: 53 (初中生)
- 金幣: 3045.9
- 散金: 15
- 紅花: 2
- 帖子: 394
- 在線: 311.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1130112
- 注冊(cè): 2010-10-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
2樓2012-02-22 14:51:48
quiller2000
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 160 (高中生)
- 貴賓: 0.114
- 金幣: 2752.9
- 散金: 50
- 紅花: 26
- 帖子: 1168
- 在線: 167.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 895537
- 注冊(cè): 2009-11-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+5): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2012-02-22 20:43:19
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+5): 鼓勵(lì)積極應(yīng)助！ 2012-02-22 20:43:19
|
問(wèn)題是你的引物啊！我們通常的引物的末端都是-OH，在體外可不好直接形成磷酸二酯鍵呢！而做磷酸化我不知道會(huì)不會(huì)兩端都磷酸化了！ 而site-direction kit最后是通過(guò)細(xì)胞來(lái)擴(kuò)增的；，單鏈進(jìn)入細(xì)胞后再?gòu)?fù)制生成的。因此，你還是要好好考慮一下！ PS，20 copie還是很多的，增加一下細(xì)胞的量應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的，做克隆神馬的還是很容易的，除非你要去轉(zhuǎn)染細(xì)胞什么的，那到是一個(gè)體力活兒，呵呵！ Good luck! |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
joyjane88
3樓2012-02-22 15:55:40
joyjane88
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 142.7
- 散金: 3
- 帖子: 43
- 在線: 20.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1183633
- 注冊(cè): 2011-01-05
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
4樓2012-02-22 16:25:01
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +12 | 稻妻小編 2026-03-26 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +7 | Koxui 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑 +6 | 楒桉 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調(diào)劑 +9 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +4 | 26要上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277跪求調(diào)劑 +5 | 1915668 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +14 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +4 | 來(lái)財(cái)aa 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +4 | 我真的很想學(xué)習(xí) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +3 | Amber00 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +6 | 加一一九 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 藍(lán)山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | L when 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|