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thestormcong銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
pkd46質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
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| 各位師兄師姐，我最近要做red基因敲除�，F(xiàn)在在做第一步，將pkd46質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中。通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)化，在AMP平板上長(zhǎng)出大量轉(zhuǎn)化子，通過(guò)挑單菌落到含有AMP的搖瓶，過(guò)夜后也有大量菌體，而將野生株菌接種至AMP搖瓶，則沒(méi)有菌體生長(zhǎng)。表明細(xì)菌里應(yīng)該已經(jīng)有質(zhì)粒。但是幾次提取質(zhì)粒，都沒(méi)有能夠提取到，后來(lái)得知pkd46是低拷貝質(zhì)粒，于是在提質(zhì)粒時(shí)加大菌體量，得到一點(diǎn)點(diǎn)條帶，幾乎沒(méi)有。不知道是怎么回事。是不是質(zhì)粒真的就這么點(diǎn)，還是壓根就沒(méi)有轉(zhuǎn)化成功�，F(xiàn)在很是郁悶。后來(lái)干脆就對(duì)質(zhì)粒用阿拉伯糖誘導(dǎo)，20mM，一個(gè)多小時(shí)誘導(dǎo)，也沒(méi)有見(jiàn)條帶與對(duì)照有差異。現(xiàn)在很是郁悶，麻煩各位師兄師姐提供點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。。非常感謝!!! |
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susizheng
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2012-02-27 09:54:16
thestormcong
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2012-02-27 16:36:42
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