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njyang2006金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)用Vector NTI如何實(shí)現(xiàn)在pET28a中加入目的基因片段的譜圖繪制。
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本人選用上游Nde I，下游Xho I酶切位點(diǎn)。 繪制譜圖時(shí)發(fā)現(xiàn)pET28a的譜圖中啟動(dòng)子和終止子的順序剛好與實(shí)際的方向相反，請(qǐng)問(wèn)這種情況下，如何把目的基因片段添加進(jìn)去？ |
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susizheng
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如果按照vector軟件操作說(shuō)明上一步一步來(lái)，先將片段酶切，再將載體酶切，再連接，這樣軟件會(huì)識(shí)別酶切位點(diǎn)處的粘性末端，方向軟件會(huì)自動(dòng)識(shí)別。（當(dāng)然這樣畫(huà)圖譜我覺(jué)得挺麻煩的） 我一般直接將載體兩酶切位點(diǎn)間其他酶切位點(diǎn)序列刪掉，然后將目的片段當(dāng)序列插入到載體兩酶切位點(diǎn)中（估計(jì)你也想這么干），然后將插入的序列add feature。遇到你這種啟動(dòng)子和終止子方向相反的情況，我先將目的基因reverse一下，然后同上面操作。這時(shí)候add feature時(shí)，在complementary前面打上勾，這樣基因就和啟動(dòng)子方向保持一致了。 |
3樓2012-03-01 14:06:04
njyang2006
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4樓2012-03-01 14:23:31
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5樓2012-03-01 17:05:29
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