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amq7392鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求教離子交換柱純化蛋白的問題
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本人用DEAE Sepharose FF純化一種酶，柱子為1.6X30cm，柱床高約20cm，上樣緩沖液20mM Tris-HCl，用0—0.5M NaCl梯度洗脫，流速約2ml/min。問題是：在整個(gè)梯度洗脫過程中僅出現(xiàn)一個(gè)很大的峰，峰高A280不到0.02，但特別寬，三四個(gè)小時(shí)才出完，經(jīng)檢測酶活，我的目標(biāo)產(chǎn)物就存在于整個(gè)峰中。我重復(fù)了兩三次，都是這種情況，請問這是怎么回事？是我裝柱有問題還是洗脫條件有問題？還有就是，當(dāng)梯度完后，高鹽洗脫時(shí)（1M NaCl），柱床高度下降明顯，有兩三個(gè)厘米，這是怎么回事呢？謝謝各位！ [ Last edited by amq7392 on 2012-3-13 at 19:24 ] |
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