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baby1_9253344金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求鑒定PCR擴(kuò)增電泳圖
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如圖，擴(kuò)增小片段（200多bp），0為空白，1到7為樣品，右邊倆位markerDL2000。 不是生物專業(yè)的，不曉得這算擴(kuò)增出來了嗎？ 還有，最上面的那個(gè)應(yīng)該是引物二聚體嗎（0號(hào)樣品也有的那個(gè)條帶）？ 如果要膠回收，切膠的時(shí)候要把拖尾的部分也切了嗎？ 如果要切膠回收，用EB染色紫外光下切，不能超過多久？（怕紫外照久了突變） 門外漢。。。問題比較多。。。謝謝大家了！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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baby1_9253344(金幣+1): 2012-03-13 23:15:31
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baby1_9253344(金幣+1): 2012-03-13 23:15:31
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這點(diǎn)用質(zhì)量也太差了，marker都這么模糊 1. 0空白是什么，沒有模板么，還是沒有引物，還是怎么的？ 2. 我想說，這很可能不是你要的帶的。你跑小片段的時(shí)候，膠濃度高點(diǎn)，2%或許可能更好些 3. 紫外下切割要不了多長時(shí)間吧，一般沒事的，畢竟一般切膠的紫外強(qiáng)度不會(huì)很大的，盡量快些就好了。 4.小片段有時(shí)候不是很好回收，找個(gè)適合小片段的試劑盒  |
2樓2012-03-13 22:08:23
baby1_9253344
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3樓2012-03-13 23:13:21
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4樓2012-03-13 23:17:07
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5樓2012-03-14 09:37:07
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6樓2012-03-14 14:05:00
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7樓2012-03-14 14:18:02
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8樓2012-03-14 21:36:03
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baby1_9253344: 金幣+3 2012-05-03 14:35:13
baby1_9253344: 金幣+3 2012-05-03 14:35:13
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從圖上看不是非常特異，先提高退火溫度試試，軟件給的退火溫度只供參考，不同軟件算出來有時(shí)候很不一樣。還有下次把膠圖正放，即膠孔在上，別問我為什么，習(xí)慣。先確定下根據(jù)marker，出現(xiàn)的條帶大小正確嗎？若正確就是PCR條件優(yōu)化的問題。別只給個(gè)DL2000啊，誰記得住那么多marker的條帶，可以標(biāo)下每條的大小。 可能不是很用，但可以幫你把問題弄清楚，找出癥結(jié)所在，就比較知道下一步要做什么了 |
9樓2012-05-03 14:07:25
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