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dd812007135木蟲 (正式寫手)
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[求助]
細(xì)胞培養(yǎng)后形態(tài)變得不太規(guī)則的因素
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HEla細(xì)胞經(jīng)傳代后，經(jīng)12小時(shí)的培養(yǎng)后，觀察有大量的圓亮點(diǎn)，以及細(xì)胞形態(tài)也變得不太規(guī)則，又不是污染的癥狀，高手們，請(qǐng)問是不是我操作上有什么問題？ 1.吸除舊培養(yǎng)液，加入5MLPBS洗滌，重復(fù)一次。 2。加入1.5ML胰酶消化1分鐘。 3。吸掉胰酶，加入5ML新鮮培養(yǎng)液，吹打（吹打時(shí)不知老是會(huì)有氣泡） 4.移入離心管離心5分鐘，倒掉上清液，加入1ML培養(yǎng)液，吹打。 5.在新培養(yǎng)瓶中加入5ml培養(yǎng)液，接入300ul細(xì)胞液。 6.放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 |
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dd812007135
木蟲 (正式寫手)
送鮮花一朵
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4樓2012-04-04 00:52:26
wtyyyyy1988
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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你加了胰酶不用血清終止的么？還是你的培養(yǎng)基里已經(jīng)加好？吹打的時(shí)候最好不要起泡，對(duì)細(xì)胞的損傷還是比較大的，胰酶消化得好的話應(yīng)該輕輕一吹就掉了。你說的十二小時(shí)的情況可能是由于部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁延伸，有的剛貼沒延伸依舊處于圓形 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2012-03-29 14:27:58
肖穎2009
鐵蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare: 金幣+3, BioEPI+1, 歡迎常來生物科學(xué)版交流 2012-03-30 19:07:58
細(xì)胞變圓應(yīng)該是老化的原因，傳代次數(shù)多了有變圓的細(xì)胞出現(xiàn)屬正�，F(xiàn)象。細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則的問題，我培養(yǎng)的細(xì)胞也出現(xiàn)過，你往培養(yǎng)液里加點(diǎn)谷氨酰胺看看，谷氨酰胺在培養(yǎng)液中很不穩(wěn)定，容易降解，需要一段時(shí)間后補(bǔ)加，具體配方你可以查一下，如有需要我也可以告訴你~ 我在往培養(yǎng)液中加了谷氨酰胺后細(xì)胞的狀態(tài)明顯有好轉(zhuǎn)，現(xiàn)在長(zhǎng)得很好。祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
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3樓2012-03-29 20:18:36
dd812007135
木蟲 (正式寫手)
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5樓2012-04-04 00:53:16
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