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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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天鳥(niǎo)

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[求助] 連接轉(zhuǎn)化出現(xiàn)很多微小的菌落已有1人參與

首先我的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)純化，純化DNA的圖還是比較亮的。我連接的片段是400BP ，我連接的體系是：4微升DNA，1微升載體19-t,和solution I 5微升，在16度連接了3小時(shí)，圖AMP+的平板后培養(yǎng)12小時(shí)發(fā)現(xiàn)菌落的大小不一致，大的菌旁邊很多很小的菌落，菌落PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率只有50-70%，而且挑菌的時(shí)候也很不順利，我挑的相對(duì)大些的菌落時(shí)，旁邊就有小菌落。我這個(gè)重復(fù)做了兩次，結(jié)果都差不多。平板也做了兩批，也沒(méi)有區(qū)別

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快樂(lè)生活，我快樂(lè)

1樓 2012-04-01 14:54:40

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hyacinth326

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

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西瓜: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流 2012-04-01 17:55:59

建議稍微提高一下抗生素的濃度，我前幾天就遇到過(guò)這種情況，我那管amp用到最后剩200ul了，被我加到培養(yǎng)基里倒平板，也是出現(xiàn)很多衛(wèi)星菌落，我一看就果斷換了一管抗生素倒了平板，就好了~~~

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3樓2012-04-01 15:46:09

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超然渡陳

金蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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西瓜: 金幣+3, 正解！ 2012-04-01 15:39:54
天鳥(niǎo): 金幣+1 2012-04-01 16:10:30

小的那些是衛(wèi)星菌落。陽(yáng)性克隆長(zhǎng)一段時(shí)間以后周?chē)目股貢?huì)降解，這樣原來(lái)被抑制的假陽(yáng)性菌就會(huì)生長(zhǎng)而形成小的菌落。

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2樓2012-04-01 15:36:39

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wxy1989714

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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天鳥(niǎo): 金幣+1 2012-04-01 16:10:15

連接時(shí)間是不是短了點(diǎn)？16度才連3小時(shí)

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樹(shù)葉飛舞，火之意志。

4樓2012-04-01 15:50:57

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匿名

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天鳥(niǎo): 金幣+1 2012-04-01 16:10:09

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5樓2012-04-01 16:04:14

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