 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 588 | 回復(fù): 1 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
[求助]
關(guān)于載體的問題
|
|||
|
小弟最近遇到點(diǎn)問題，很是頭疼，請(qǐng)教大家一下。 上個(gè)月的時(shí)候，我構(gòu)建了一個(gè)蛋白的FLAG融合表達(dá)載體，測(cè)序沒有問題。轉(zhuǎn)染以后，定量和半定量，都有結(jié)果，上調(diào)500倍左右。當(dāng)時(shí)沒做WESTERN直接做的IP，結(jié)果驗(yàn)證不到FLAG的表達(dá)。一直沒解決。 這幾天又構(gòu)建了同一個(gè)蛋白的EGFP的載體，測(cè)序沒問題。可是轉(zhuǎn)染以后，完全看不到綠色熒光。 請(qǐng)問到底是什么原因？這個(gè)蛋白在細(xì)胞中本身也有表達(dá)。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有127人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 虛心請(qǐng)教關(guān)于平—粘末端的連接問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 關(guān)于分子篩載體孔徑的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于農(nóng)桿菌單菌株/雙質(zhì)粒表達(dá)載體的構(gòu)建問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于SiRNA表達(dá)載體構(gòu)建的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助】新蟲請(qǐng)教關(guān)于載體吸潮的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PEt-28a質(zhì)粒載體表達(dá)蛋白質(zhì)的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于T載體連接問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
超然渡陳
金蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 50 (小學(xué)生)
- 金幣: 1174.9
- 帖子: 127
- 在線: 41.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1110016
- 注冊(cè): 2010-09-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, Good!果斷優(yōu)秀~ 2012-04-03 15:07:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, Good!果斷優(yōu)秀~ 2012-04-03 15:07:45
|
一，你構(gòu)建載體所用的是成熟肽還是帶有信號(hào)肽的全長肽？假如是分泌蛋白的話必須去掉信號(hào)肽才能做功能和定位研究。不然你的目的蛋白都大量分泌到胞外了，胞內(nèi)殘留的那一點(diǎn)用一般方法檢查很困難。 二，是不是你的目的蛋白過大？在與Flag或者GFP融合表達(dá)的時(shí)候會(huì)吧這兩個(gè)蛋白包被在中間？ 三，構(gòu)建載體的時(shí)候目的蛋白和Flag或者GFP直接要加一個(gè)linker，二者直接連接的話會(huì)影響彼此的空間構(gòu)象。 |
2樓2012-04-03 10:46:26
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 niini123 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +12 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
[考研] 26考研一志愿中國石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +6 | 嘉年新程 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +8 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +3 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+8
|
.6lL 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南化學(xué)（0703）總分337求調(diào)劑 +8 | niko- 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學(xué)工程 專碩 +19 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|