 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (4510)
- >導(dǎo)師招生 (635)
- >考研 (599)
- >基金申請(qǐng) (352)
- >文獻(xiàn)求助 (243)
- >考博 (171)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (170)
- >休閑灌水 (85)
- >碩博家園 (68)
- >論文投稿 (52)
- >招聘信息布告欄 (50)
- >博后之家 (49)
- >論文道賀祈福 (32)
- >SciFinder/Reaxys (21)
- >綠色求助(高懸賞) (21)
- >找工作 (21)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3300 | 回復(fù): 9 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿(mǎn)足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話(huà)題的所有回帖 | |||||
zhoujiang09新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄加模板問(wèn)題 已有4人參與
|
||||
| 請(qǐng)問(wèn)各位同仁，我現(xiàn)在要做逆轉(zhuǎn)錄PCR，我做逆轉(zhuǎn)錄之前測(cè)得RNA的濃度是340ng/ul，我按照f(shuō)ermentas逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的要求要從中取1ugRNA做逆轉(zhuǎn)錄，我先拿1000/RNA的濃度=2.94，是不是我取2.94ulRNA的量就相當(dāng)于1ng RNA��？還有，我取2.94ulRNA的話(huà)，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說(shuō)明，是不是只要調(diào)整水的量使反應(yīng)體系不變就可以了��？Sample Text |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 【分子生物】EPI帖 | 分子實(shí)驗(yàn) |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有286人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助！關(guān)于RT-PCR的問(wèn)題！
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 做RT-PCR的戰(zhàn)友們，內(nèi)標(biāo)定量怎么做？
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 病毒RNA提取后做RT-PCR
已經(jīng)有13人回復(fù)
- cDNA做普通PCR擴(kuò)不出條帶來(lái)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】RNA峰度不夠！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR不成功
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR
已經(jīng)有5人回復(fù)
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線(xiàn): 1449.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 271749
- 注冊(cè): 2006-08-13
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
送鮮花一朵 
5樓2012-04-03 13:14:37
atlanticwi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線(xiàn): 313.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1099992
- 注冊(cè): 2010-09-15
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
2樓2012-04-03 10:46:21
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線(xiàn): 1449.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 271749
- 注冊(cè): 2006-08-13
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞衰老
- 管轄: 分子生物
★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 西瓜斑斑很專(zhuān)業(yè)的說(shuō) 2012-04-05 11:30:43
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 西瓜斑斑很專(zhuān)業(yè)的說(shuō) 2012-04-05 11:30:43
樓上說(shuō)得不錯(cuò)了。我補(bǔ)充下 “是不是只要調(diào)整水的量使反應(yīng)體系不變就可以了��？”這個(gè)的前提是RNA的體積不要超過(guò)反轉(zhuǎn)錄體系的1/10。因?yàn)樘崛NA用的試劑里有很多可以抑制酶活性的成分，如果RNA體積過(guò)多，殘余的東東會(huì)抑制反轉(zhuǎn)錄的。試劑盒說(shuō)明書(shū)上應(yīng)該有提到這點(diǎn)，一般就是不超1/10。 萬(wàn)一加1ug的2.94uL已經(jīng)超過(guò)了1/10體積怎么辦捏？沒(méi)關(guān)系，減少RNA用量就可以了。試劑盒上說(shuō)的1ug應(yīng)該是RNA用量的上限，告訴你不要用超過(guò)這個(gè)量的RNA，否則反轉(zhuǎn)錄酶活性有限會(huì)不能把全部RNA都反轉(zhuǎn)錄成cDNA，這樣定量就不準(zhǔn)確了。并不是說(shuō)少于這個(gè)量的RNA就不能做。你用500ng、100ng都是可以的，具體參照試劑盒上的說(shuō)明，應(yīng)該還有提到RNA用量的下限。 如果你是做定量，那么盡量所有樣品都使用同樣量的RNA來(lái)做反轉(zhuǎn)錄吧，這樣得到的cDNA的濃度就是一樣的了。結(jié)合你所有樣品的RNA濃度，然后在試劑盒說(shuō)明的RNA用量上下限之間取一個(gè)合適的值，讓所有樣品使用的RNA體積都小于1/10，這樣就ok了。 |
3樓2012-04-03 12:26:10
zhoujiang09
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 142.8
- 帖子: 31
- 在線(xiàn): 8.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1733408
- 注冊(cè): 2012-04-02
- 專(zhuān)業(yè): 原發(fā)性腎臟疾病
我上周做了這個(gè)點(diǎn)的預(yù)實(shí)驗(yàn)，RNA濃度是340ng/ul，逆轉(zhuǎn)錄的時(shí)候我取了1ul，擴(kuò)增出來(lái)的cDNA再PCR,產(chǎn)物還跑得不錯(cuò)，沒(méi)有引物二聚體，也沒(méi)有非特異性擴(kuò)增。我準(zhǔn)備上熒光定量了。4樓2012-04-03 13:05:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +3 | 晨昏線(xiàn)與星海 2026-03-19 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +4 | 脫穎而出 2026-03-16 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 305求調(diào)劑 +4 | FY_yy 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求各位老師收留 +10 | 秋有木北 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +6 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專(zhuān)家開(kāi)始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專(zhuān)碩326求調(diào)劑 +6 | 墨煜姒莘 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專(zhuān)碩有科研經(jīng)歷三項(xiàng)國(guó)獎(jiǎng)兩個(gè)實(shí)用型專(zhuān)利一項(xiàng)省級(jí)立項(xiàng) +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科院材料273求調(diào)劑 +4 | yzydy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工 323 英一+數(shù)二+物化，一志愿：哈工大 本人本科雙一流 +4 | 自由的_飛翔 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 328化工專(zhuān)碩求調(diào)劑 +4 | 。，。，。，。i 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0817化學(xué)工程與技術(shù)考研312分調(diào)劑 +3 | T123 tt 2026-03-12 | 3/150 |
|