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sugar900309

木蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 關(guān)于引物設(shè)計(jì)的問(wèn)題

我要克隆一個(gè)基因然后表達(dá)，但這個(gè)基因cds前面只有九個(gè)堿基，我該怎么設(shè)計(jì)引物？如何找前人做過(guò)的關(guān)于這個(gè)基因的資料？
引物長(zhǎng)度一個(gè)16bp,一個(gè)17bp，Tm值51℃，可以用嗎？有什么影響

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克隆基因全長(zhǎng)引物設(shè)計(jì)問(wèn)題已經(jīng)有32人回復(fù)

1樓 2012-04-05 20:45:42

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sugar900309

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引用回帖:

2樓: Originally posted by starseacow at 2012-04-05 21:16:18:
1 “但這個(gè)基因cds前面只有九個(gè)堿基”不太明白樓主的意思
2 如何找前人做過(guò)的關(guān)于這個(gè)基因的資料
最簡(jiǎn)單，把你所做基因全稱(chēng)，到NCBI查一查，序列信息和相關(guān)文獻(xiàn)都可以找到
3 引物長(zhǎng)度一個(gè)16bp,一個(gè)17bp，Tm值 ...

就是起始密碼子前面只有九個(gè)堿基，要怎么設(shè)計(jì)引物才能將整個(gè)基因擴(kuò)出來(lái)？

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4樓2012-04-06 09:20:18

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starseacow

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小丹木木: 金幣+2, 呵呵 2012-04-06 08:59:21

1 “但這個(gè)基因cds前面只有九個(gè)堿基”不太明白樓主的意思
2 如何找前人做過(guò)的關(guān)于這個(gè)基因的資料
最簡(jiǎn)單，把你所做基因全稱(chēng)，到NCBI查一查，序列信息和相關(guān)文獻(xiàn)都可以找到
3 引物長(zhǎng)度一個(gè)16bp,一個(gè)17bp，Tm值51℃，可以用嗎？
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2樓2012-04-05 21:16:18

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qjy_134

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你就是要把他克隆到表達(dá)載體了，跟前面的堿基有什么關(guān)系

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3樓2012-04-05 21:55:41

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sugar900309

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引用回帖:

5樓: Originally posted by hyacinth326 at 2012-04-06 10:05:19:
這個(gè)沒(méi)有問(wèn)題吧，我們經(jīng)常直接從起始密碼子開(kāi)始設(shè)計(jì)引物，不斷調(diào)整引物的長(zhǎng)度，然后找到一對(duì)最好的引物，像這種情況，引物肯定不可能盡善盡美，這沒(méi)有辦法，沒(méi)有最好只有更好，哈哈。。。TM值51確實(shí)有點(diǎn)低啊，一般 ...

那終止密碼子可以編在引物里嗎，我要克隆的基因在NCBi上下的序列終止密碼子后面也只有20個(gè)堿基對(duì)于我這種初學(xué)者要設(shè)計(jì)合適的引物真的好難啊

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6樓2012-04-07 21:21:13

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