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消錦lzhy
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[求助]
熒光定量pcr
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最近做了一次熒光定量pcr，遇到一些問題，請(qǐng)求高人指點(diǎn)： 做普通pcr用takara的mightyamp酶能擴(kuò)增出較好的條帶，所以做熒光定量pcr也用含有該酶的試劑，結(jié)果做出來的結(jié)果很不理想。空白Ct值24左右，拷貝數(shù)低于10的4次方都跟空白差不多。說明書也講該酶不太適合做標(biāo)準(zhǔn)曲線，建議標(biāo)曲用Ex Taq 酶，但是我之前做普通pcr試過Ex taq酶，電泳檢測(cè)沒有條帶，所以非常擔(dān)心換用含有Ex Taq酶的試劑做定量做不出來。由于做定量成本較高，雖有此懷疑又不敢輕易嘗試，求高人指點(diǎn)迷津。 熒光定量結(jié)果電泳檢測(cè)如下圖： 標(biāo)準(zhǔn)品，從左到右依次10倍稀釋（第三個(gè)空沒有樣品） 左邊三個(gè)是陰性對(duì)照，右邊三個(gè)是不加引物只加模板的空白對(duì)照 |
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2樓2012-04-09 16:04:04
消錦lzhy 
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3樓2012-04-09 16:31:49
消錦lzhy
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4樓2012-04-09 16:33:32
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