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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 蛋白突變后不表達了
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laverne銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
蛋白突變后不表達了 已有4人參與
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大家好，我現(xiàn)在實驗遇到個現(xiàn)象，苦惱ing，煩請大家給予指點 定點突變蛋白之后，在bl21中不表達了，嘗試各種優(yōu)化，沒有效果，有人能解釋這是什么原因嗎？ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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一般來說，由于真核生物細胞中的由于存在翻譯起始因子eIF4A,eIF4B在核糖體翻譯時去除mRNA的二級結(jié)構(gòu)，所以只要不是很大的二級結(jié)構(gòu)改變一般不至于影響翻譯過程。你可以檢測一下工程細胞中翻譯起始因子eIF4A,eIF4B是否都正常表達，若沒有足量的eIF4A，那么mRNA的二級結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)改變可能足以引起表達障礙，若沒有足量的eIF4B，那么eIF4A足量表達eIF4A的效率也會很低。 另外，我覺得你該查一下工程細胞的目的蛋白質(zhì)突變后是不是影響了它與別的蛋白質(zhì)或DNA特異性片段之間的專一性結(jié)合，比如說它原本與某種轉(zhuǎn)錄因子又結(jié)合，但是突變后使該結(jié)合失效。 |
6樓2012-04-23 22:10:03
dreamofyou
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3樓2012-04-20 16:38:53
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 應助指數(shù)+1, 果然專業(yè)！ 2012-04-23 18:50:33
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, 應助指數(shù)+1, 果然專業(yè)！ 2012-04-23 18:50:33
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一般來講，先確定新的啟動子存在且有效，其次確定起始轉(zhuǎn)錄位點存在且有效，然后有軟件模擬一下mRNA突變后是否構(gòu)成了二級結(jié)構(gòu)，是否有移碼突變，是否構(gòu)成了稀有密碼子，是否提前中斷翻譯，再有考慮突變產(chǎn)物蛋白質(zhì)是否構(gòu)成新的酶切位點和是否在三維結(jié)構(gòu)上發(fā)生了折疊異常（引入突變位點也是研究蛋白質(zhì)折疊的一種常規(guī)實驗技術）。 還要考慮突變產(chǎn)物蛋白質(zhì)是不是參與形成了原來沒有的超分子結(jié)構(gòu)（聚合體）或者影響了原有的四級結(jié)構(gòu)的形成。 |
4樓2012-04-20 17:13:50
laverne
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5樓2012-04-23 18:48:37
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