 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 3329 | 回復(fù): 20 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
xiazhiwuxie銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
大片段連接問題
|
|
|
實(shí)驗(yàn)室得到一個(gè)片段為2300bp左右的DNA序列，但是連接了半個(gè)月都沒有連上，連接體系是：19T 0.5ul 目的條帶 5ul solution I 5ul 過夜4度，16度連接3h 也做過16度連接兩夜 做過4度 期間確定目的條帶回收正確，連接體系也用了最新的，感受態(tài)是買的，在這個(gè)條帶的靠近3‘端約200bp是已知的，根據(jù)這個(gè)片段設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增約為140bp。 得到的結(jié)果：1.不長菌 2.長菌，但是擴(kuò)增無條帶 3.長菌，擴(kuò)增出140bp,但是測序后，結(jié)果告知插入片段只有200bp,且這200bp片段就是已知部分，抽了質(zhì)粒后得知條帶大約就是比2000bp的大點(diǎn)。 我快瘋了，折騰了半個(gè)月，序列還沒得到，求高人指導(dǎo)！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有168人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
方杜若
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5
- 帖子: 1
- 在線: 43.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1713963
- 注冊: 2012-03-24
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
20樓2013-04-03 21:43:34
dingfang0707
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 1570.1
- 散金: 499
- 紅花: 2
- 帖子: 507
- 在線: 208.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1177271
- 注冊: 2010-12-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
2樓2012-04-14 20:20:10
ghs25372216
禁蟲 (正式寫手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實(shí)驗(yàn)室沒人做過，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實(shí)驗(yàn)室沒人做過，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2012-04-15 09:46:42
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)正解解答問題 2012-04-16 13:55:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)正解解答問題 2012-04-16 13:55:10
|
1.連接體系為10uL，目的DNA片段應(yīng)為4.5uL,一般試劑盒都可用，連接溫度是不關(guān)鍵因素，時(shí)間過夜即可。 2.一定要保證PCR要達(dá)到一定濃度和純度才可以，這一點(diǎn)至關(guān)重要。 3.另外，樓主說的300bp引物是菌液PCR檢測引物嗎？最好用一個(gè)載體引物，一個(gè)片段上的引物，假陽性會(huì)降低，而且最好把全長擴(kuò)出來。 4.若果菌液ＰＣＲ擴(kuò)出來了就不用提質(zhì)粒了酶切了，可以直接測序。 |
4樓2012-04-15 12:16:44
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工學(xué)調(diào)劑 +7 | 用戶573181 2026-03-20 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 初試270分 求調(diào)劑 +4 | 谷雨上岸 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調(diào)劑 +5 | jiajunX 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +5 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0805 316求調(diào)劑 +3 | 大雪深藏 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 13341 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8 | sllhht 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 招收調(diào)劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|