 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (1993)
- >考研 (127)
- >導(dǎo)師招生 (114)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (76)
- >教師之家 (28)
- >論文道賀祈福 (26)
- >考博 (25)
- >休閑灌水 (23)
- >碩博家園 (20)
- >無(wú)機(jī)/物化 (19)
- >文獻(xiàn)求助 (18)
- >論文投稿 (17)
- >公派出國(guó) (14)
- >基金申請(qǐng) (12)
- >留學(xué)生活 (7)
- >找工作 (6)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3296 | 回復(fù): 20 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
xiazhiwuxie銀蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
大片段連接問(wèn)題
|
||
|
實(shí)驗(yàn)室得到一個(gè)片段為2300bp左右的DNA序列，但是連接了半個(gè)月都沒(méi)有連上，連接體系是：19T 0.5ul 目的條帶 5ul solution I 5ul 過(guò)夜4度，16度連接3h 也做過(guò)16度連接兩夜 做過(guò)4度 期間確定目的條帶回收正確，連接體系也用了最新的，感受態(tài)是買(mǎi)的，在這個(gè)條帶的靠近3‘端約200bp是已知的，根據(jù)這個(gè)片段設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增約為140bp。 得到的結(jié)果：1.不長(zhǎng)菌 2.長(zhǎng)菌，但是擴(kuò)增無(wú)條帶 3.長(zhǎng)菌，擴(kuò)增出140bp,但是測(cè)序后，結(jié)果告知插入片段只有200bp,且這200bp片段就是已知部分，抽了質(zhì)粒后得知條帶大約就是比2000bp的大點(diǎn)。 我快瘋了，折騰了半個(gè)月，序列還沒(méi)得到，求高人指導(dǎo)！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有129人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 構(gòu)建pBI121表達(dá)載體，目的基因與載體連接不上
已經(jīng)有54人回復(fù)
- BAC文庫(kù)連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有22人回復(fù)
- PCR ， 雙酶切，連接問(wèn)題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 連接體系的確定
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 載體連接
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 為什么我做的酶切連接總是不長(zhǎng)斑呢？
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】連接幾次，仍然不見(jiàn)菌落出現(xiàn)
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】pMD-18T載體連接出現(xiàn)了問(wèn)題，請(qǐng)各位高手指點(diǎn)�。�！
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】超大片段連接問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】4kb片段的連接
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】大片段連接轉(zhuǎn)化成功與否問(wèn)題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】長(zhǎng)片段的連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR克隆片段連接問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)正解解答問(wèn)題 2012-04-16 13:55:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+2, ★有幫助, PCR回收后條帶清晰 2012-04-16 12:12:16
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)正解解答問(wèn)題 2012-04-16 13:55:10
|
1.連接體系為10uL，目的DNA片段應(yīng)為4.5uL,一般試劑盒都可用，連接溫度是不關(guān)鍵因素，時(shí)間過(guò)夜即可。 2.一定要保證PCR要達(dá)到一定濃度和純度才可以，這一點(diǎn)至關(guān)重要。 3.另外，樓主說(shuō)的300bp引物是菌液PCR檢測(cè)引物嗎？最好用一個(gè)載體引物，一個(gè)片段上的引物，假陽(yáng)性會(huì)降低，而且最好把全長(zhǎng)擴(kuò)出來(lái)。 4.若果菌液ＰＣＲ擴(kuò)出來(lái)了就不用提質(zhì)粒了酶切了，可以直接測(cè)序。 |
4樓2012-04-15 12:16:44
dingfang0707
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 1570.1
- 散金: 499
- 紅花: 2
- 帖子: 507
- 在線: 208.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1177271
- 注冊(cè): 2010-12-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
2樓2012-04-14 20:20:10
ghs25372216
禁蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實(shí)驗(yàn)室沒(méi)人做過(guò)，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiazhiwuxie: 金幣+5, ★有幫助, 我昨天想用T4連接酶連著，但是實(shí)驗(yàn)室沒(méi)人做過(guò)，今天試試 2012-04-15 10:12:57
小丹木木: 金幣+3, 恩，可以試下 2012-04-16 13:54:47
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
3樓2012-04-15 09:46:42
5樓2012-04-15 16:56:45
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級(jí)已過(guò)，有科研經(jīng)歷 +8 | 曦熙兮 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 國(guó)自科面上基金字體 +6 | iwuli 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 機(jī)械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調(diào)劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)一志愿211 總分320求調(diào)劑 +5 | 瑪卡巴卡啊哈 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 四川大學(xué)085601材料工程專碩 初試294求調(diào)劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科278分求調(diào)劑 +5 | 周慢熱啊 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|