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[交流]
擴(kuò)增曲線不平滑是怎么回事？
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我又來了。。。 今天又做了一批熒光PCR，最后的結(jié)果是大致的曲線走向都對的，就是有個問題曲線不夠平滑。圖在下面。以前做了幾次也有這個問題呢~請問這會是什么原因？ P.S.我用的是ABI7500做的，想同時做出擴(kuò)增曲線和溶解曲線，請問有木有熟悉儀器的大蝦，應(yīng)該怎么setup才行呢？貌似實驗type只能是一種。。。  配工作液還不太熟練，我怕配錯；于是想一管一管加，這樣至少不會有差錯。 這是4個重復(fù)的反應(yīng)，用的是50ul體系 這也是4個重復(fù)的，但是100ul體系，貌似效果比50 的好 [ Last edited by 可帥兒 on 2012-4-19 at 13:42 ] |
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西瓜: 金幣+4, Good！ 2012-04-22 19:11:17
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嗯.................. ABI的東西固然好，但也不用擔(dān)心 東洋紡(TOYOBO)的東西也是不錯的，一大堆人用他的KOD用的那么帶勁的.................沒有說試劑不適合機(jī)器這種說法，除非那個公司很邪惡的就把自己的產(chǎn)品優(yōu)化到最好，但通常我覺得不會有這個問題，再說SYBR Green及TaqMan都不是ABI或TOYOBO公司的特有商標(biāo)，作為Molecular Probes公司的專利，不會說其他公司就使用的不一樣哦，雖然Molecular Probes和ABI現(xiàn)在是一個Life Technologies旗下的................... 所以實驗的問題基本不會是正牌公司的產(chǎn)品問題 除非你拿到的就是假貨，盡量還是優(yōu)化實驗條件吧  |
22樓2012-04-22 13:04:32
2樓2012-04-19 13:44:05
3樓2012-04-19 15:53:18
可帥兒4樓2012-04-19 16:19:06
5樓2012-04-19 17:18:16
6樓2012-04-19 17:22:52
西瓜
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8樓2012-04-19 18:25:08
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是不便宜，但為了做驗證沒辦法= =10樓2012-04-19 18:42:09
11樓2012-04-19 18:54:06
12樓2012-04-19 18:55:03
13樓2012-04-19 18:58:06
好吧，太失敗了。我也在找原因呢，頭疼的 14樓2012-04-19 18:58:37
15樓2012-04-19 19:04:37
16樓2012-04-19 19:07:36
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20樓2012-04-21 22:19:31
21樓2012-04-21 22:21:05
謝謝專家指點�。�！23樓2012-04-23 16:02:08
西瓜
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24樓2012-04-23 18:43:39
25樓2012-04-23 20:07:42
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26樓2012-04-23 21:54:40
27樓2012-05-04 00:32:22
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30樓2012-05-04 11:00:08
31樓2012-05-04 11:02:49
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-05-04 13:51:35
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ROX是一種參比染料，ABI的儀器在讀取熒光信號值時同時也會讀取ROX的值，因為ROX的熒光值是恒定的，所以通過這個可以校正孔間差異和每個循環(huán)讀取信號的不穩(wěn)定。 儀器配套軟件在繪圖時是考慮ROX值的，如果你沒加的話，曲線就很難看，估計你應(yīng)該是沒加。 這個是可以在設(shè)置里修改的，但看你貌似對儀器不熟，所以可能是沒把這個選項去掉。 一般的實時反應(yīng)Mix里都會送兩種參比染料，ROX和ROX II，ABI 7500應(yīng)該加ROX II，其他機(jī)型要看試劑說明書。 |
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32樓2012-05-04 11:09:27
謝謝專家指教！33樓2012-05-04 11:18:10
34樓2012-05-04 11:26:29
35樓2012-05-05 17:01:17
謝謝指教！ 36樓2012-05-06 14:49:13
37樓2012-05-06 20:38:03
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西瓜: 金幣+3, Good！加不加差別確實不大，不過加了的話重復(fù)性好很多，個人經(jīng)驗~ 2012-05-07 17:56:43
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大姐啊 幸虧回來看到這幫人在這說了 你應(yīng)該看看試劑說明書的 ROX染料一般都是直接加入的 我用的TOYOBO Mix就是這樣的 你可以看看試劑盒里哪里有什么額外的ROX讓你加的啦........... 如果你的Mix是呈現(xiàn)微微一點紅色的話 本身就說明有ROX染料的啦.................................. 如果有問題 只能是你沒有設(shè)定去讀ROX 而不是沒加ROX 再者有沒有讀ROX的影響我試過 比較微�。ㄒ膊慌懦龑嶒灄l件未優(yōu)化造成的大差異） 本來ROX是用來矯正孔間差異的，若是有ROX和沒有ROX下區(qū)別那么大 這個做機(jī)器的公司就可以去死了....................... 個人看法 若有說錯請高手指點  [ Last edited by atlanticwi on 2012-5-6 at 21:22 ] |
38樓2012-05-06 21:14:41
39樓2012-05-06 22:34:30
40樓2012-05-06 22:54:46
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流 2012-05-07 13:57:15
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嗯...................... 我用過TOYOBO和Invitrogen公司兩種Mix 均是直接加入的，TOYOBO產(chǎn)品沒有直接注明 Invitrogen公司會寫含ROX的XXXXX讓人一目了然，并非是ABI的用而其他儀器不用，據(jù)我所知大多數(shù)儀器都支持ROX，反之則是Roche的LightCycler和Bio-Rad的部分儀器（好像是IQ系列吧）不支持ROX矯正。 沒有用過ABI7300/7500所以不知道多種ROX情況 若你有詳細(xì)情報，還煩請告知，偶比較感興趣 個人看法 有說錯的話請指點 |
41樓2012-05-06 23:48:11
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你說的也對，我用過的東西也不多。不過個人認(rèn)為直接加入不是很合理，畢竟混到mix里就要注意避光了。我用的是takara的，是分開的兩種，7300用rox，7500用rox II [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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42樓2012-05-07 00:17:55
43樓2012-05-07 01:20:06
44樓2012-05-07 01:30:36
45樓2012-05-07 07:16:22
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47樓2012-05-07 14:22:58
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西瓜: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-05-07 17:57:22
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ABI的7000,7300,7500都需要加入ROX校正吧，因為好像孔間有光程差，具有光學(xué)邊緣效應(yīng)，Biorad好像也需要的，羅氏的LC 480是加裝了五棱鏡折射，沒有光程差，無需Rox校正，而非不支持，Qiagen的rotor Gene Q系列是單獨(dú)激發(fā)單獨(dú)檢測每個管子的熒光信號的，也不需要Rox校正 個人意見，歡迎指正~ |
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48樓2012-05-07 14:30:16
49樓2012-05-07 14:55:07
50樓2012-05-07 14:59:45
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