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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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可帥兒

銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[交流] 擴(kuò)增曲線不平滑是怎么回事？

我又來(lái)了。。。
今天又做了一批熒光PCR，最后的結(jié)果是大致的曲線走向都對(duì)的，就是有個(gè)問(wèn)題曲線不夠平滑。圖在下面。以前做了幾次也有這個(gè)問(wèn)題呢~請(qǐng)問(wèn)這會(huì)是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同時(shí)做出擴(kuò)增曲線和溶解曲線，請(qǐng)問(wèn)有木有熟悉儀器的大蝦，應(yīng)該怎么setup才行呢？貌似實(shí)驗(yàn)type只能是一種。。。

配工作液還不太熟練，我怕配錯(cuò)；于是想一管一管加，這樣至少不會(huì)有差錯(cuò)。

這是4個(gè)重復(fù)的反應(yīng)，用的是50ul體系

這也是4個(gè)重復(fù)的，但是100ul體系，貌似效果比50 的好

[ Last edited by 可帥兒 on 2012-4-19 at 13:42 ]

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1樓 2012-04-17 15:30:17

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可帥兒

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4樓: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-19 16:19:06:
嗯...........
感覺(jué)體系過(guò)大了哦，100uL體系完全沒(méi)有必要的，同時(shí)你用的什么MasterMix呢，還有感覺(jué)前面幾個(gè)圖不是不平滑，而是沒(méi)有起峰呢

我用的是日本東洋紡的TAQMAN MASTER MIX，會(huì)不會(huì)是和機(jī)器不太匹配的原因呢？謝謝你！

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9樓2012-04-19 18:29:01

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可帥兒

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哎~~自己來(lái)頂頂！求大神指點(diǎn)(⊙o⊙)哦

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2樓2012-04-19 13:44:05

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chlorella409

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★ ★ ★ ★ ★
可帥兒(金幣+1): 謝謝參與
西瓜: 金幣+4, Good！ 2012-04-19 17:27:17

首先我認(rèn)為擴(kuò)增曲線不光滑可能時(shí)因?yàn)檫€在基線期，其次，你要加溶解曲線的話可以在experiment menu的experiment properties里面選擇檢測(cè)試劑SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打鉤，第三，工作液可以先mix再分到每個(gè)孔里，cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]

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3樓2012-04-19 15:53:18

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atlanticwi

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★ ★ ★
可帥兒(金幣+1): 謝謝參與
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-04-19 17:26:48

嗯...........
感覺(jué)體系過(guò)大了哦，100uL體系完全沒(méi)有必要的，同時(shí)你用的什么MasterMix呢，還有感覺(jué)前面幾個(gè)圖不是不平滑，而是沒(méi)有起峰呢

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可帥兒

4樓2012-04-19 16:19:06

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