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[求助]
求助關于土壤細菌分離鑒定的知識，希望朋友幫忙解答
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| 我要從土壤中分離和鑒定出未知的菌（細菌或真菌均存在），求助怎樣設計實驗方案，怎樣的一個實驗思路也行。 |
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2樓2012-04-17 20:43:46
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
renlu0521: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝！ 2012-04-17 22:11:50
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1.你是否是從土壤中篩選新菌種？如果是篩選新菌種的話，那這個還是有一定難度的，要用特殊的培養(yǎng)基進行針對性的篩選，比如篩哪類菌找對應的培養(yǎng)基，當然有的培養(yǎng)基是秘方了，如果你實驗室有做過的就直接用現(xiàn)成的方法即可。 2.如果你是做土壤可培養(yǎng)微生物分析的話，那么你考慮你的樣點是否有特殊性，比如低溫，高溫，高鹽等情況，也是針對性的選用幾種培養(yǎng)基進行篩選。如果是普通的土壤，那么用幾種常用的培養(yǎng)基比如牛肉膏蛋白胨for細菌，高氏一號for放線菌，孟加拉紅培養(yǎng)基for真菌等進行篩選。 3.針對你后來提的問題，培養(yǎng)基上至少有兩種菌，你最好還是劃線分離純化一下，鏡檢是否是單菌再進行PCR鑒定，當然一般劃線分離1-2次挑取單菌落也可以。分離純化的方法就是劃線分離了（這個百度一下就知道了），鑒定就看你是什么菌了，細菌的話用16S通用引物（27f，1492r），真菌的話用18S通用引物（ITS1，ITS4）擴增后送測。 不知道我是否說清楚了，相互交流  |
3樓2012-04-17 20:54:32
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您好~非常感謝幫忙，但是還是有幾個不大明白的地方（根據(jù)您提出的三個方面） 1.目前是有兩種土壤樣品。不知道其中可能含有那種菌種，但目前可以確定的是一定有病原菌。由于我們實驗室不是研究這方面的，現(xiàn)在有點茫然。目前也只用了PDA培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行初步篩選。。。也不知道對不對 主要的目的就是講土壤樣品中主要的病原菌進行分離，并鑒定出所屬種屬。 2.如上所說，土壤是病害土壤，目前只用了以上兩種培養(yǎng)基（另外PDA培養(yǎng)基中加入了硫酸鏈霉素抑制細菌和放線菌生長，我也知道并不能抑制所有細菌。。但是目前師兄給的實驗思路是這樣的就照做了） 3.目前還只進行了第一次的劃線培養(yǎng)。。。主要是考慮多種菌的問題。。所以不大明白需要劃線培養(yǎng)到怎樣的程度進行PCR檢測 以上，非常感謝您的幫忙~~結束后會補上金幣，謝謝您~~ |
4樓2012-04-17 22:11:01
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7樓2012-04-18 16:15:07
非常感謝您的幫助~~今天又詳細的問了老師，需要找出主要的病原菌~~也已經(jīng)了解怎樣做了，非常感謝!8樓2012-04-18 22:34:17
9樓2015-03-25 15:41:46
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