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renlu0521新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助關(guān)于土壤細(xì)菌分離鑒定的知識(shí),希望朋友幫忙解答
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| 我要從土壤中分離和鑒定出未知的菌(細(xì)菌或真菌均存在),求助怎樣設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,怎樣的一個(gè)實(shí)驗(yàn)思路也行。 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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1.你是否是從土壤中篩選新菌種?如果是篩選新菌種的話,那這個(gè)還是有一定難度的,要用特殊的培養(yǎng)基進(jìn)行針對(duì)性的篩選,比如篩哪類菌找對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基,當(dāng)然有的培養(yǎng)基是秘方了,如果你實(shí)驗(yàn)室有做過(guò)的就直接用現(xiàn)成的方法即可。 2.如果你是做土壤可培養(yǎng)微生物分析的話,那么你考慮你的樣點(diǎn)是否有特殊性,比如低溫,高溫,高鹽等情況,也是針對(duì)性的選用幾種培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。如果是普通的土壤,那么用幾種常用的培養(yǎng)基比如牛肉膏蛋白胨for細(xì)菌,高氏一號(hào)for放線菌,孟加拉紅培養(yǎng)基for真菌等進(jìn)行篩選。 3.針對(duì)你后來(lái)提的問(wèn)題,培養(yǎng)基上至少有兩種菌,你最好還是劃線分離純化一下,鏡檢是否是單菌再進(jìn)行PCR鑒定,當(dāng)然一般劃線分離1-2次挑取單菌落也可以。分離純化的方法就是劃線分離了(這個(gè)百度一下就知道了),鑒定就看你是什么菌了,細(xì)菌的話用16S通用引物(27f,1492r),真菌的話用18S通用引物(ITS1,ITS4)擴(kuò)增后送測(cè)。 不知道我是否說(shuō)清楚了,相互交流 |

新蟲(chóng) (初入文壇)
新蟲(chóng) (初入文壇)
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您好~非常感謝幫忙,但是還是有幾個(gè)不大明白的地方(根據(jù)您提出的三個(gè)方面) 1.目前是有兩種土壤樣品。不知道其中可能含有那種菌種,但目前可以確定的是一定有病原菌。由于我們實(shí)驗(yàn)室不是研究這方面的,現(xiàn)在有點(diǎn)茫然。目前也只用了PDA培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。。。也不知道對(duì)不對(duì) 主要的目的就是講土壤樣品中主要的病原菌進(jìn)行分離,并鑒定出所屬種屬。 2.如上所說(shuō),土壤是病害土壤,目前只用了以上兩種培養(yǎng)基(另外PDA培養(yǎng)基中加入了硫酸鏈霉素抑制細(xì)菌和放線菌生長(zhǎng),我也知道并不能抑制所有細(xì)菌。。但是目前師兄給的實(shí)驗(yàn)思路是這樣的就照做了) 3.目前還只進(jìn)行了第一次的劃線培養(yǎng)。。。主要是考慮多種菌的問(wèn)題。。所以不大明白需要?jiǎng)澗培養(yǎng)到怎樣的程度進(jìn)行PCR檢測(cè) 以上,非常感謝您的幫忙~~結(jié)束后會(huì)補(bǔ)上金幣,謝謝您~~ ![]() |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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1,你們要篩選病原菌的話,知道大概是什么菌嗎?有沒(méi)有相關(guān)的文獻(xiàn)資料篩選過(guò),他們用的什么培養(yǎng)基?你們用PDA(真菌)和牛肉膏蛋白胨(細(xì)菌)初篩應(yīng)該可以,鑒定就我之前說(shuō)的方法了。 2,PDA加抗生素是可以的,如果你們條件允許,直接買孟加拉紅培養(yǎng)基(配好了的成品,也添加了抗生素的)直接用,方便一些。 3,一開(kāi)始涂布之后,挑取單菌進(jìn)行劃線,然后再挑取單菌落進(jìn)行劃線,一般劃2次就行了。不知道你說(shuō)的“主要是考慮多種菌的問(wèn)題”是啥意思,如果你劃線之后還有多種菌的話,你就得再分別挑到新的培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離,直至得到單一菌了。 |

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