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renlu0521新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助關(guān)于土壤細(xì)菌分離鑒定的知識(shí)，希望朋友幫忙解答
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| 我要從土壤中分離和鑒定出未知的菌（細(xì)菌或真菌均存在），求助怎樣設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，怎樣的一個(gè)實(shí)驗(yàn)思路也行。 |
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renlu0521
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您好~非常感謝幫忙，但是還是有幾個(gè)不大明白的地方（根據(jù)您提出的三個(gè)方面） 1.目前是有兩種土壤樣品。不知道其中可能含有那種菌種，但目前可以確定的是一定有病原菌。由于我們實(shí)驗(yàn)室不是研究這方面的，現(xiàn)在有點(diǎn)茫然。目前也只用了PDA培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。。。也不知道對不對 主要的目的就是講土壤樣品中主要的病原菌進(jìn)行分離，并鑒定出所屬種屬。 2.如上所說，土壤是病害土壤，目前只用了以上兩種培養(yǎng)基（另外PDA培養(yǎng)基中加入了硫酸鏈霉素抑制細(xì)菌和放線菌生長，我也知道并不能抑制所有細(xì)菌。。但是目前師兄給的實(shí)驗(yàn)思路是這樣的就照做了） 3.目前還只進(jìn)行了第一次的劃線培養(yǎng)。。。主要是考慮多種菌的問題。。所以不大明白需要?jiǎng)澗�培養(yǎng)到怎樣的程度進(jìn)行PCR檢測 以上，非常感謝您的幫忙~~結(jié)束后會(huì)補(bǔ)上金幣，謝謝您~~  |
4樓2012-04-17 22:11:01
renlu0521
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2樓2012-04-17 20:43:46
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1.你是否是從土壤中篩選新菌種？如果是篩選新菌種的話，那這個(gè)還是有一定難度的，要用特殊的培養(yǎng)基進(jìn)行針對性的篩選，比如篩哪類菌找對應(yīng)的培養(yǎng)基，當(dāng)然有的培養(yǎng)基是秘方了，如果你實(shí)驗(yàn)室有做過的就直接用現(xiàn)成的方法即可。 2.如果你是做土壤可培養(yǎng)微生物分析的話，那么你考慮你的樣點(diǎn)是否有特殊性，比如低溫，高溫，高鹽等情況，也是針對性的選用幾種培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。如果是普通的土壤，那么用幾種常用的培養(yǎng)基比如牛肉膏蛋白胨for細(xì)菌，高氏一號(hào)for放線菌，孟加拉紅培養(yǎng)基for真菌等進(jìn)行篩選。 3.針對你后來提的問題，培養(yǎng)基上至少有兩種菌，你最好還是劃線分離純化一下，鏡檢是否是單菌再進(jìn)行PCR鑒定，當(dāng)然一般劃線分離1-2次挑取單菌落也可以。分離純化的方法就是劃線分離了（這個(gè)百度一下就知道了），鑒定就看你是什么菌了，細(xì)菌的話用16S通用引物（27f，1492r），真菌的話用18S通用引物（ITS1，ITS4）擴(kuò)增后送測。 不知道我是否說清楚了，相互交流 |
3樓2012-04-17 20:54:32
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1，你們要篩選病原菌的話，知道大概是什么菌嗎？有沒有相關(guān)的文獻(xiàn)資料篩選過，他們用的什么培養(yǎng)基？你們用PDA（真菌）和牛肉膏蛋白胨（細(xì)菌）初篩應(yīng)該可以，鑒定就我之前說的方法了。 2，PDA加抗生素是可以的，如果你們條件允許，直接買孟加拉紅培養(yǎng)基（配好了的成品，也添加了抗生素的）直接用，方便一些。 3，一開始涂布之后，挑取單菌進(jìn)行劃線，然后再挑取單菌落進(jìn)行劃線，一般劃2次就行了。不知道你說的“主要是考慮多種菌的問題”是啥意思，如果你劃線之后還有多種菌的話，你就得再分別挑到新的培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離，直至得到單一菌了。 |
5樓2012-04-18 09:59:24
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