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liuxing1-1至尊木蟲 (知名作家)
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[求助]
土壤總細(xì)菌16S PCR-條帶不亮的問題
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本人打算做T-RFLP，現(xiàn)在正在做土壤總細(xì)菌16S PCR，引物是27F和1492R，PCR體系是：25ul體系：dNTP（10UM） 0.5ul, 引物（10UM）各1uL，Taq E 0.5ul，10×buffer緩沖液（5U/uL），模板0.5uL，以水補齊。PCR條件是94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸1 min，30 個循環(huán)，72℃下延伸10min。按照這個條件，能夠P出條帶，但是問題是條帶不亮，甚至marker都不亮。期間，也換過EB染色液、TAE，但問題依舊。大家?guī)兔Ψ治鲆幌率鞘裁丛虬伞?br />
[ Last edited by liuxing1-1 on 2012-4-19 at 10:05 ] |
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