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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 定量pcr標曲
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消錦lzhy
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定量pcr標曲
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| 請教各位蟲友：我之前做定量pcr（sybr green法）標準曲線，由于引物二聚體比較嚴重，10的5次方拷貝數(shù)以下就不準確了，現(xiàn)在考慮換一對新的引物，但是試著做了一下，也有個很嚴重的問題，就是所有的標準品Ct值幾乎一樣，我是做了梯度稀釋，從10的2次方到10的八次方，不過沒有非特異性產物，不知什么原因。我在想是不是需要重新做標準品呢？因為原來的標準品是用原來那個400bp左右的引物的pcr產物做克隆再提取質粒得到的，現(xiàn)在想換一對200bp左右的引物，需要重新做標準品嗎嗎？（注：我用新的引物試著擴增了一下原標準品，也有比較清晰的條帶） |
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孫啟亮
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