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jamy1989木蟲 (小有名氣)
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透析后蛋白沉淀
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我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析復性,透析完后全部沉淀了,跑膠什么都沒有!我透析的步驟是: 1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 3、binding buffer 20mM磷酸鈉 500mM氯化鈉 5mM咪唑 PH=7.6 各位看看問題出在哪里呢?我每步在4度冰箱透析了24個小時!是不是我的蛋白濃度太大了呢?還是我透析的步驟太少。炕蛘咂渌裁丛?急呀??? |
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